用于对酿酒酵母DNA片段进行PCR扩增。每个扩增的靶基因通过启动子与靶基因之间设计的重叠端，融合到PGK1启动子序列的下游端。生成的钝端融合PCR产物PGK1 +ILV2、PGK1+ILV3、PGK1+ILV5、PGK1+ILV1+ILV2或PGK1+IAT2通过克隆试剂盒克隆到pCR-Blunt，II-TOPO载体中。从这些pTOPO克隆中切出PGK1启动子和目的基因，分别连接到载体YDp-L、YDp-W、YDp-H、YDp-U和YDp-U 中。分别在ILV2、ILV3、ILV5、ILV6和BAT2基因中间用BglII、BglII、EcoRI、NarI和AagI酶切。线性化的质粒被染色体整合到酵母菌株CEN.PK2-1C中。
参考文献：Matsuda F, Ishii J, Kondo T, Ida K, Tezuka H, Kondo A. Increased isobutanol production in Saccharomyces cerevisiae by eliminating competing pathways and resolving cofactor imbalance. Microb Cell Fact. 2013 Dec 5;12:119.
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用于对酿酒酵母DNA片段进行PCR扩增。每个扩增的靶基因通过启动子与靶基因之间设计的重叠端，融合到PGK1启动子序列的下游端。生成的钝端融合PCR产物PGK1 +ILV2、PGK1+ILV3、PGK1+ILV5、PGK1+ILV1+ILV2或PGK1+IAT2通过克隆试剂盒克隆到pCR-Blunt，II-TOPO载体中。从这些pTOPO克隆中切出PGK1启动子和目的基因，分别连接到载体YDp-L、YDp-W、YDp-H、YDp-U和YDp-U 中。分别在ILV2、ILV3、ILV5、ILV6和BAT2基因中间用BglII、BglII、EcoRI、NarI和AagI酶切。线性化的质粒被染色体整合到酵母菌株CEN.PK2-1C中。
参考文献：Matsuda F, Ishii J, Kondo T, Ida K, Tezuka H, Kondo A. Increased isobutanol production in Saccharomyces cerevisiae by eliminating competing pathways and resolving cofactor imbalance. Microb Cell Fact. 2013 Dec 5;12:119.
