利用引物从静脉盐单胞菌基因组中扩增出ectABC操纵子。PCR产物纯化后，与Kpn I和BamH I的酶切位点融合克隆，连接到线性化的载体pTrc99a上，形成质粒pTrcectABC。为构建质粒pET-ectABC，以H.venusta基因组DNA为模板，用引物进行PCR扩增ectABC。PCR产物纯化后，用BamH I和Xho I的酶切位点融合克隆插入pET-28a。采用Red重组法缺失lysA、thrA、pykF、ldhA和pta基因。
参考文献：Zhang H, Liang Z, Zhao M, Ma Y, Luo Z, Li S, Xu H. Metabolic Engineering of Escherichia coli for Ectoine Production With a Fermentation Strategy of Supplementing the Amino Donor. Front Bioeng Biotechnol. 2022 Jan 25;10:824859.
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利用引物从静脉盐单胞菌基因组中扩增出ectABC操纵子。PCR产物纯化后，与Kpn I和BamH I的酶切位点融合克隆，连接到线性化的载体pTrc99a上，形成质粒pTrcectABC。为构建质粒pET-ectABC，以H.venusta基因组DNA为模板，用引物进行PCR扩增ectABC。PCR产物纯化后，用BamH I和Xho I的酶切位点融合克隆插入pET-28a。采用Red重组法缺失lysA、thrA、pykF、ldhA和pta基因。
参考文献：Zhang H, Liang Z, Zhao M, Ma Y, Luo Z, Li S, Xu H. Metabolic Engineering of Escherichia coli for Ectoine Production With a Fermentation Strategy of Supplementing the Amino Donor. Front Bioeng Biotechnol. 2022 Jan 25;10:824859.
