你好，请登录   免费注册    |    收藏本站
联系电话: 0574-87917803
你好,请登录   免费注册 | 收藏
联系电话: 0574-87917803
热门搜索: 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 红菇 香菇
乳酸菌电转化方法
乳酸菌电转化方法
规格:
货期:
编号:TSPLA11098
品牌:Testobio
产品名称 乳酸菌电转化方法
商品货号 TSPLA11098
基本信息 乳酸球菌电转化试剂配制： （1）电转缓冲液I：称取0.2 g六水氯化镁，205.4 g蔗糖，1.86g三水磷酸钾，用去离子水定容至1L,然后用浓盐酸调节pH至7.5。 （2）电转缓冲液II (g/L)：称取171.15g蔗糖，并量100mL甘油，加去离子水定容至1L。 （3）复苏液：称取20 g葡萄糖，2g柠檬酸氢二铵，171.15 g蔗糖，2 g磷酸氢二钾，10g胰蛋白胨，0.2g七水硫酸镁，4g酵母提取物，3g乙酸钠，0.05g-水硫酸锰，8 g牛肉膏，ImL的吐温80,加去离子水定容至1L。 （4）Tris-Cl缓冲液(pH8.0)：称取121 mg Tris溶于去离子水中，并用浓盐酸调节 pH至8.0,最后加水定容至100 mLo （5）溶菌酶母液(Img/mL)： 5mg溶菌酶干粉溶于5mLTris-Cl缓冲液(pH8.0) 中，用0.22 um滤膜过滤除菌，-20℃避光保存。溶菌酶为碱性溶菌酶。 （6）D/L-苏氨酸溶液(1 mg/mL)：称取587mgD/L-苏氨酸溶于5 mL超纯水中，并 使用0.22um滤膜进行过滤除菌。 （7）红霉素母液(50mg/mL)：称取250mg红霉素粉末溶于5 mL无水乙醇中，完 全溶解后，使用0.22um滤膜进行过滤除菌，并于-20℃避光保存。 乳酸球菌电转化感受态制备：(所用缓冲液提前置于冰上冷却)。 （1）取冻存管中的乳酸球菌划线至MRS平板上，于42°C培养箱中静置培养 24 h,长出单菌落后挑取至20 mL液体MRS中42°C, 150 rpm培养12h。 （2）取400ul培养液转接至新鲜MRS培养液中(含终浓度40 mM的D/L-苏氨酸溶液)， 42°C, 150rpm培养约6h至OD600为1.0,冰上放置10min. （3）取1.5 mL菌液4 °C, 10000 rpm离心5 min,弃上清，加入1 mL电转缓冲液 I悬浮菌体后，4 °C, 10000 rpm离心5 min,弃上清，再加入1 mL电转缓冲液I重复离心一次，去上清。 （4）用100ul电转缓冲液I悬浮菌体，加入10ul的lmg/mL溶菌酶溶液，并于 37 °C水浴锅中处理至少30 min.。 （5）4°C, 10000 rpm离心5 min后，弃上清，再加入1 mL电转缓冲液I悬浮菌体后离心去上清(重复一次)，最后加入70ul电转缓冲液II悬浮细胞，得到电转感受态。 乳酸球菌电转条件 （１）取7ul质粒和加入70ul感受态细胞，轻轻混合后，冰上放置10min。 （２）将质粒与感受态的混合液转移至预冷的1mm电击杯中，在2000V，200Ω，25uF条件下进行电击（Gene  Pulser  Xcell  BioRad），然后将电击后的液体立即转移至900ml预冷的复苏液中，冰上放置５min。 （３）42℃，150rpm 培养大约3h,视菌生长情况，6000rpm离心5min,取800ul上清，涂布于加红霉素MRS平板。红霉素的浓度为10ug/ml。 （4）42℃培养48h,挑取菌落验证。并提取质粒进行测序。保菌时甘油终浓度为10%。
使用说明
图谱
首页/产品中心/其他质粒
产品中心
联系我们 CONTACT US
0574-87917803
testobio@163.com

浙江省宁波市镇海区庄市街道兴庄路9号

创e慧谷42号楼B幢401室

最新促销
名称:芽孢杆菌胞外蛋白分泌机制
名称:解淀粉芽孢杆菌中高效表达角蛋白酶，构建直接降解羽毛粉的重组工程菌。
名称:植物乳杆菌 T7 启动子表达系统，超高表达效率
名称:pnz8149质粒，nz3900宿主菌 食品级乳酸乳球菌表达系统
名称:枯草芽孢杆菌T7 启动子表达系统，利用T7启动子的超高启动活性，在枯草芽孢杆菌中高效分泌表达外源蛋白。
名称:利用 干酪乳酸杆菌ATCC393 表达 明星阿克曼氏菌（Akkermansia muciniphila）的P9蛋白（减肥蛋白）
名称:在植物乳杆菌中，过表达亚硝酸还原酶基因（nir），有效降解酸菜发酵过程中产生的亚硝酸盐
名称:利用T7启动子在枯草芽孢杆菌中高表达外源蛋白
名称:Nissle1917 构建表面展示载体，利用细菌外泌体生产抗癌蛋白。
名称:CtoB为基础的枯草芽孢杆菌芽孢表面展示系统
名称:大肠杆菌msbb位点整合表达
名称:枯草芽孢杆菌SpoA整合位点 表达外源蛋白，产量高
乳酸菌电转化方法
乳酸菌电转化方法
规格:
货期:
编号:TSPLA11098
品牌:Testobio
产品名称 乳酸菌电转化方法
商品货号 TSPLA11098
基本信息 乳酸球菌电转化试剂配制： （1）电转缓冲液I：称取0.2 g六水氯化镁，205.4 g蔗糖，1.86g三水磷酸钾，用去离子水定容至1L,然后用浓盐酸调节pH至7.5。 （2）电转缓冲液II (g/L)：称取171.15g蔗糖，并量100mL甘油，加去离子水定容至1L。 （3）复苏液：称取20 g葡萄糖，2g柠檬酸氢二铵，171.15 g蔗糖，2 g磷酸氢二钾，10g胰蛋白胨，0.2g七水硫酸镁，4g酵母提取物，3g乙酸钠，0.05g-水硫酸锰，8 g牛肉膏，ImL的吐温80,加去离子水定容至1L。 （4）Tris-Cl缓冲液(pH8.0)：称取121 mg Tris溶于去离子水中，并用浓盐酸调节 pH至8.0,最后加水定容至100 mLo （5）溶菌酶母液(Img/mL)： 5mg溶菌酶干粉溶于5mLTris-Cl缓冲液(pH8.0) 中，用0.22 um滤膜过滤除菌，-20℃避光保存。溶菌酶为碱性溶菌酶。 （6）D/L-苏氨酸溶液(1 mg/mL)：称取587mgD/L-苏氨酸溶于5 mL超纯水中，并 使用0.22um滤膜进行过滤除菌。 （7）红霉素母液(50mg/mL)：称取250mg红霉素粉末溶于5 mL无水乙醇中，完 全溶解后，使用0.22um滤膜进行过滤除菌，并于-20℃避光保存。 乳酸球菌电转化感受态制备：(所用缓冲液提前置于冰上冷却)。 （1）取冻存管中的乳酸球菌划线至MRS平板上，于42°C培养箱中静置培养 24 h,长出单菌落后挑取至20 mL液体MRS中42°C, 150 rpm培养12h。 （2）取400ul培养液转接至新鲜MRS培养液中(含终浓度40 mM的D/L-苏氨酸溶液)， 42°C, 150rpm培养约6h至OD600为1.0,冰上放置10min. （3）取1.5 mL菌液4 °C, 10000 rpm离心5 min,弃上清，加入1 mL电转缓冲液 I悬浮菌体后，4 °C, 10000 rpm离心5 min,弃上清，再加入1 mL电转缓冲液I重复离心一次，去上清。 （4）用100ul电转缓冲液I悬浮菌体，加入10ul的lmg/mL溶菌酶溶液，并于 37 °C水浴锅中处理至少30 min.。 （5）4°C, 10000 rpm离心5 min后，弃上清，再加入1 mL电转缓冲液I悬浮菌体后离心去上清(重复一次)，最后加入70ul电转缓冲液II悬浮细胞，得到电转感受态。 乳酸球菌电转条件 （１）取7ul质粒和加入70ul感受态细胞，轻轻混合后，冰上放置10min。 （２）将质粒与感受态的混合液转移至预冷的1mm电击杯中，在2000V，200Ω，25uF条件下进行电击（Gene  Pulser  Xcell  BioRad），然后将电击后的液体立即转移至900ml预冷的复苏液中，冰上放置５min。 （３）42℃，150rpm 培养大约3h,视菌生长情况，6000rpm离心5min,取800ul上清，涂布于加红霉素MRS平板。红霉素的浓度为10ug/ml。 （4）42℃培养48h,挑取菌落验证。并提取质粒进行测序。保菌时甘油终浓度为10%。
使用说明
图谱