用引物对SUT1进行PCR扩增。以具有G418抗性的KanMX盒作为重组酵母菌株的选择标记。标记盒来自于载体pJET1.2-B-KanMXP。以Q5过表达片段作为模板，利用Q5高保真DNA聚合酶对G-GRE3、G-SUT1和G-KanMX进行PCR扩增。这些片段被设计为携带重叠区域来组装重组载体pUCδRTKδ。S1.5’和3’delta侧翼区域分别结合G-GRE3和G-KanMX段，用限制性内切酶SacI和SalI对pUC19进行双酶切，凝胶提取纯化线性化载体。组装基因盒和线性化的载体，构建环状质粒pUCδRTKδ。
参考文献：Kogje AB, Ghosalkar A. Xylitol production by genetically modified industrial strain of Saccharomyces cerevisiae using glycerol as co-substrate. J Ind Microbiol Biotechnol. 2017 Jun;44(6):961-971.
技术服务 Technology Services
联系我们
CONTACT US
-
0574-87917803
服务热线 -
testobio@163.com
邮箱
用引物对SUT1进行PCR扩增。以具有G418抗性的KanMX盒作为重组酵母菌株的选择标记。标记盒来自于载体pJET1.2-B-KanMXP。以Q5过表达片段作为模板，利用Q5高保真DNA聚合酶对G-GRE3、G-SUT1和G-KanMX进行PCR扩增。这些片段被设计为携带重叠区域来组装重组载体pUCδRTKδ。S1.5’和3’delta侧翼区域分别结合G-GRE3和G-KanMX段，用限制性内切酶SacI和SalI对pUC19进行双酶切，凝胶提取纯化线性化载体。组装基因盒和线性化的载体，构建环状质粒pUCδRTKδ。
参考文献：Kogje AB, Ghosalkar A. Xylitol production by genetically modified industrial strain of Saccharomyces cerevisiae using glycerol as co-substrate. J Ind Microbiol Biotechnol. 2017 Jun;44(6):961-971.
