腺相关病毒
腺相关病毒
腺相关病毒（Adeno-associated viruse，AAV）载体是以AAV 基因组为骨架改造而来的基因递送工具。腺相关病毒属于细小病毒科的低致病性病毒，它的基因组为线性单链DNA，大小约 4.7 kB，
在基因组两端分别有一条反向末端重复序列（Inverted terminal repeat，ITR），与病毒基因组高效释放、选择性复制和包装密切相关，基因组编码区有2个开放阅读框，分别编码4种Rep 蛋白和3种Cap 蛋白，它们分别在基因组复制、病毒装配以及包装中发挥着作用。
在 20 世纪 60 年代中期，腺相关病毒（AAV）首次被发现于实验室腺病毒制剂中，随后不久便在人体组织中被发现。AAV 研究的最初15-20年阐明了AAV 的几个重要方面，包括其基因组结构和组成、DNA 复制和转录、感染潜伏期和病毒组装。这些成就共同促进了将野生型 AAV2 序列成功克隆到质粒中，从而实现了遗传学研究和整个AAV2基因组的测序。这些早期研究为AAV 作为基因递送载体的应用提供了基础知识。自 AAV 载体问世以来，将其用作生物疗法也加深了我们对 AAV 转导途径中病毒与宿主相互作用的了解。
如今，重组 AAV（rAAV）已成为体内输送基因疗法的主要平台。2012 年，欧洲药品管理局批准了首个rAAV基因治疗产品 alipogene tiparvovec（Glybera），用于治疗脂蛋白脂肪酶缺乏症（REF.24）；2017年，美国批准了首个rAAV基因治疗产品 voretigene neparvovec-rzyl（Luxturna）。
腺病毒产品与服务
我们提供的AAV的包装服务涵盖以下血清型：
| 血清型 | 组织嗜性 |
|---|---|
| AAV1 | 平滑肌, 中枢神经系统, 肺, 视网膜, 内耳组织, 胰腺, 心脏, 肝 |
| AAV2 | 平滑肌, 中枢神经系统, 肝, 肾, 视网膜, 内耳组织 |
| AAV3 | 平滑肌, 肝, 肺 |
| AAV4 | 中枢神经系统, 视网膜, 肺, 肾 |
| AAV5 | 平滑肌, 中枢神经系统, 肺, 视网膜 |
| AAV6 | 平滑肌, 心脏, 肺, 脂肪组织, 肝 |
| AAV6.2 | 肺, 肝, 内耳组织 |
| AAV7 | 平滑肌, 视网膜, 中枢神经系统, 肝 |
| AAV8 | 平滑肌, 中枢神经系统, 视网膜, 内耳组织, 肝, 胰腺, 心脏, 肾, 脂肪组织 |
| AAV9 | 平滑肌, 肺, 肝, 心脏, 胰腺, 中枢神经系统, 脑，视网膜, 内耳组织, 睾丸, 肾 |
| AAV-rh10 | 平滑肌, 肺, 肝, 心脏, 胰腺, 中枢神经系统, 视网膜, 肾 |
| AAV-DJ | 肝, 心脏, 肾, 脾 |
| AAV-DJ/8 | 肝, 脑, 脾 |
| AAV-PHP.eB | 中枢神经系统 |
| AAV-PHP.S | 外周神经系统 |
| AAV2-retro | 脊神经 |
| AAV2-QuadYF | 内皮细胞 |
| AAV2.7m8 | 视网膜, 内耳组织 |
交付内容
| 非纯化ssAAV制备服务 | 纯化ssAAV制备服务 | |
|---|---|---|
| 交付内容 |
定制病毒，按照规格交付：
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定制病毒，按照规格交付：
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对照病毒，按照定制病毒的规格对应赠送：
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对照病毒，按照定制病毒的规格对应赠送：
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辅助病毒，按照定制病毒的规格对应选购：
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辅助病毒，按照定制病毒的规格对应选购：
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| 病毒重悬液 | 50 mM Tris-based缓冲液 | pH7.4 PBS-based缓冲液 |
| 运输/存储 | 干冰/-80°C，避免反复冻融 | 干冰/-80°C，避免反复冻融 |
| 推荐应用 | 体外培养细胞转导 | 体外培养细胞转导、动物体内细胞转导 |
对照病毒
为了更好地开展您的实验，我们按照“对照病毒与定制病毒的生物学应用相匹配”的原则给您赠送或者推荐对照病毒。例如，如果定制病毒表达一个基因，则推荐的对照病毒表达荧光蛋白EGFP。如果定制病毒表达打靶某个基因的shRNA，则对照病毒表达一个Scramble shRNA。推荐的对照病毒信息如下表所示：
| 对照病毒 | 对照载体名称 | 对照载体ID | 定制病毒 |
|---|---|---|---|
| EGFP对照AAV病毒 | pAAV[Exp]-CAG>EGFP:WPRE | VB010000-9287ffw | 哺乳动物基因表达AAV病毒（包含Tet-On诱导表达和FLEX条件性表达）、哺乳动物AAV CRISPR系统、哺乳动物非编码RNA表达AAV病毒 |
| mCherry对照AAV病毒 | pAAV[Exp]-CMV>mCherry | VB900129-0800rvh | |
| Scramble shRNA对照AAV病毒，EGFP荧光 | pAAV[shRNA]-CAG>EGFP-U6>Scramble_shRNA | VB010000-9489hhg | 哺乳动物shRNA干扰AAV病毒 |
| Scramble shRNA对照AAV病毒，mCherry荧光 | pAAV[shRNA]-CMV>mCherry-U6>Scramble_shRNA | VB010000-0024wah | |
| Scramble miR30-shRNA对照AAV病毒，EGFP荧光 | pAAV[miR30]-CAG>EGFP:Scramble_miR30-shRNA:WPRE | VB010000-9494mnd | 哺乳动物miR30-shRNA干扰AAV病毒 |
| Tet-On EGFP 对照AAV病毒（选购） | pAAV[Tet_on]-TRE>EGFP-CBh>tTS/rtTA | VB010000-0053bwh | 哺乳动物基因Tet-On诱导表达AAV病毒 |
| FLEX-EGFP对照AAV病毒（选购） | pAAV[FLEX_on]-CMV>rev(EGFP) | VB180820-1044gcq | 哺乳动物基因FLEX条件性表达AAV病毒 |
辅助病毒
为了更好地开展您的实验，我们按照“辅助病毒与定制病毒的生物学应用相匹配”的原则给您推荐辅助病毒。例如，如果定制病毒是一个只含TRE启动子的TetOn慢病毒，则需要一个表达rtTA的辅助病毒，才能进行诱导表达实验。推荐的辅助病毒信息如下表所示：
| 辅助病毒 | 辅助载体名称 | 辅助载体ID | 定制病毒 |
|---|---|---|---|
| SaCas9 AAV病毒（选购） | pAAV[Exp]-CMV>saCas9 | VB010000-9382per | 哺乳动物gRNA AAV病毒（不含Cas9） |
| Cre AAV病毒（选购） | pAAV[Exp]-CMV>Cre | VB010000-9443kev | 哺乳动物基因FLEX条件性表达AAV病毒 |
运输/储存
我们的AAV病毒存储在特殊的Tris缓冲液或PBS缓冲液中，并采用干冰运输。收到AAV病毒后，立即放置于-80℃，可保存约一年。若放置于-20℃，则可保存2-3周。
融解后的AAV病毒可在4℃保存1-2周。
生产/质控
我们通常使用三质粒系统包装重组AAV病毒。该系统采用一个携带目的基因的转移质粒、一个Rep-Cap表达质粒以及一个表达腺病毒基因（E4、E2A和VA）的辅助质粒共转染HEK293T包装细胞。细胞短暂孵育后，
根据血清型的不同，收集上清或者细胞裂解液，PEG浓缩获取病毒颗粒。对于超纯化AAV（体内应用级别），再通过氯化铯（CsCl）密度梯度离心对病毒颗粒进一步纯化和浓缩。
对于每一批我们生产的AAV病毒，我们的质量控制包括qPCR滴度检测、微生物负荷检测（针对细菌、真菌）、支原体检测等。若转移载体同时编码一个荧光标记基因，
我们还会将病毒进行细胞转导以测定相应的荧光表达情况。此外，对于超纯化AAV病毒，我们还可以检测内毒素水平和使用SDS-PAGE方法检测病毒纯度。
FAQs
1、腺相关病毒与腺病毒的比较?
腺病毒（AdV）属于腺病毒科，体型中等，含有双链 DNA 基因组。然而，腺相关病毒（AAV）是属于细小病毒科的小型单链 DNA 病毒。AAVs 被发现是腺病毒制剂中的一种污染物，因此得名，但它们无关。AAVs 需要腺病毒基因 E1、E4、E2a 和 VA 的存在才能复制。
2、AAV 载体的常见用途有哪些?
- 基因治疗
- 神经元追踪
- 光遗传学
- CRISPR/Cas9 传递
- 分开 AAV 以提升包装能力
