利用特异性引物对（ORF N F和ORF R）对酿酒酵母基因组DNA进行PCR扩增，获得TeN端截断的ILV基因，将截断的基因复制到p413GPD的BamHI和XhoI位点之间获得了p413GPD-ILV2ΔN54,p414GPD-ILV5ΔN48和
p416GPD-ILV3ΔN19。利用目标特异性引物对从枯草芽孢杆菌中获得开放阅读框alsS(B)，从乳酸乳球菌中获得开放阅读框 alsS(L)。为了获得单基因表达质粒，将pcr扩增产物克隆到p413GPD或p413ADH质粒中，获得了 p413GPD-alsS(L) 和 p413ADH-alsS(B)质粒。
参考文献：Park SH, Hahn JS. Development of an efficient cytosolic isobutanol production pathway in Saccharomyces cerevisiae by optimizing copy numbers and expression of the pathway genes based on the toxic effect of α-acetolactate. Sci Rep. 2019 Mar 8;9(1):3996.
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利用特异性引物对（ORF N F和ORF R）对酿酒酵母基因组DNA进行PCR扩增，获得TeN端截断的ILV基因，将截断的基因复制到p413GPD的BamHI和XhoI位点之间获得了p413GPD-ILV2ΔN54,p414GPD-ILV5ΔN48和
p416GPD-ILV3ΔN19。利用目标特异性引物对从枯草芽孢杆菌中获得开放阅读框alsS(B)，从乳酸乳球菌中获得开放阅读框 alsS(L)。为了获得单基因表达质粒，将pcr扩增产物克隆到p413GPD或p413ADH质粒中，获得了 p413GPD-alsS(L) 和 p413ADH-alsS(B)质粒。
参考文献：Park SH, Hahn JS. Development of an efficient cytosolic isobutanol production pathway in Saccharomyces cerevisiae by optimizing copy numbers and expression of the pathway genes based on the toxic effect of α-acetolactate. Sci Rep. 2019 Mar 8;9(1):3996.
