悬浮细胞专用病毒
悬浮细胞专用病毒
悬浮细胞在培养基中存活和增殖，不需要黏附在细胞培养器皿上，包括造血干细胞(来源于血液、骨髓、脾脏)，
一些转化的细胞系以及恶性肿瘤细胞等。由于其特殊属性，悬浮细胞使用病毒感染时常常出现感染效率低、细胞状态差等问题，无法顺利地进行后续研究。
为解决悬浮细胞难感染问题，公司研发了悬浮细胞专用慢病毒，该产品经实验室研发专家在40余株血液来源悬浮细胞中测试优化，从感染效率、MOI、感染后细胞状态三方面严格把控，
可全面提升20余种常见血液疾病细胞模型病毒感染效率，整体解决悬浮细胞难感染问题。
悬浮细胞专用慢病毒
慢病毒(Lentivirus)载体是以人类免疫缺陷型病毒(HIV)为基础发展起来的基因治疗载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力，可以在体内较长期的表达且安全性高。我们提供的悬浮细胞专用慢病毒是以慢病毒载体为基础改造而来，可以高效感染普通方法难以感染的悬浮细胞。
悬浮细胞专用感染增强液
HiTransB-1：公司自主研发的配合悬浮细胞病毒使用的感染增强液，可促进病毒高效感染细胞，且对细胞毒性极低，适合敏感细胞使用。HiTransB-2：在HiTransB-1基础上添加了一种阳离子聚合物，通过抑制细胞膜与病毒之间的电荷排斥，显著增加病毒对细胞的感染效率。
悬浮细胞专用病毒筛选试剂盒
包含慢病毒、逆转录病毒与感染试剂的组合套装。
产品介绍
| 产品类别 | 产品名称 | 简介 | 产品规格 |
|---|---|---|---|
|
悬浮细胞 专用慢病毒 |
过表达慢病毒 (悬浮细胞专用慢病毒) |
用于过表达编码基因 | 1E+8TU (含等量对照) |
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RNAi-定制-慢病毒 (悬浮细胞专用) |
用于下调编码基因 需提供靶点序列 |
1E+8TU (含等量对照) | |
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RNAi-Easy-慢病毒 (悬浮细胞专用) |
用于下调编码基因 提供3个干扰靶点序列 确保其中1个有效 |
1E+8TU (含等量对照) | |
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miRNA-up-慢病毒 (悬浮细胞专用) |
用于过表达miRNA | 1E+8TU (含等量对照) | |
|
miRNA-down-慢病毒 (悬浮细胞专用) |
用于下调miRNA | 1E+8TU (含等量对照) |
载体选择
| 病毒类型 | 调控方式 | 载体编号 | 元件顺序 | 原核抗性 | 真核抗性 |
|---|---|---|---|---|---|
|
悬浮细胞 专用慢病毒 |
过表达 | GV569 | Ubi-MCS-3FLAG-CBh-gcGFP-IRES-puromycin | Ampicillin | IRES-Puromycin |
| RNAi | GV570 | hU6-MCS-CBh-gcGFP-IRES-puromycin | Ampicillin | IRES-Puromycin | |
| microRNA-up | GV567 | hU6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin | Ampicillin | IRES-Puromycin | |
| GV568 | Ubi-MCS-SV40-EGFP-IRES-puromycin | Ampicillin | IRES-Puromycin | ||
| microRNA-down | GV566 | hU6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin | Ampicillin | IRES-Puromycin |
悬浮细胞MOI推荐
| 疾病类型 | 细胞系 | 中文名 | 病毒 | MOI | 感染试剂 |
|---|---|---|---|---|---|
| ALL | CCRF-CEM |
人急性淋巴细胞 白血病T淋巴细胞 |
慢病毒 | 50 | HiTransG BP |
| HuT 78 |
人T淋巴细胞 白血病细胞 |
慢病毒 | 20 | HiTransG BA | |
| Jurkat |
人T淋巴细胞 白血病细胞 |
慢病毒 | 20 | HiTransG BP | |
| MOLT-4 |
人急性淋巴母细胞 白血病细胞 |
慢病毒 | 40 | HiTransG BA | |
| Daudi |
人Burkitt's 淋巴瘤细胞 |
慢病毒 | 30 | HiTransG BP | |
| Reh |
人急性非B非T 淋巴细胞白血病 |
慢病毒 | 30 | HiTransG BA | |
| AML | NB4 | 人 | 慢病毒 | 50 | HiTransG BP |
| THP-1 | 人单核细胞白血病 | 慢病毒 | 30 | HiTransG BA | |
| HL-60 | 人原髓细胞白血病细胞 | 慢病毒 | 30 | HiTransG BP | |
| HEL | 人红白细胞白血病细胞 | 慢病毒 | 30 | HiTransG BA | |
| CML | K-562 | 人慢性髓原白血病细胞 | 慢病毒 | 30 | HiTransG BP |
|
Acute T Cell Leukemia |
1 2.1 | 人 | 慢病毒 | 30 | HiTransG BP |
|
Basophilic Leukemia |
RBL -2H3 |
大鼠嗜碱性细胞 白血病细胞 |
慢病毒 | 40 | HiTransG BA |
|
Hairy Cell Leukemia |
Mo [Mo T] | 人 | 慢病毒 | 20 | HiTransG BA |
| Leukemia | OKT 11 |
小鼠B淋巴细胞 小鼠淋巴瘤细胞 |
慢病毒 | 50 | HiTransG BP |
|
Lymphocytic Leukemia |
L 1210 | 小鼠白血病细胞 | 慢病毒 | 50 | HiTransG BP |
|
Myelomonoblastic Leukemia |
CESS | 人 | 慢病毒 | 40 | HiTransG BP |
|
Plasma Cell Leukemia |
ARH-77 | 人 | 慢病毒 | 20 | HiTransG BP |
|
Burkitt's Lymphoma |
Ramos (RA 1) | 人 | 慢病毒 | 20 | HiTransG BA |
| Lymphoma | EL4 | 小鼠淋巴瘤细胞 | 慢病毒 | 50 | HiTransG BP |
| JeKo-1 | 人套细胞淋巴瘤细胞 | 慢病毒 | 40 | HiTransG BP | |
| YAC-1 | 小鼠淋巴瘤细胞 | 慢病毒 | 5 | HiTransG BP | |
|
T-Cell Lymphoblastic Lymphoma |
SUP-T1 [VB] | 人 | 慢病毒 | 20 | HiTransG BP |
|
Histiocytic Lymphoma |
U-937 |
人组织细胞 淋巴瘤细胞 |
慢病毒 | 30 | HiTransG BP |
|
AElson Murine Leukemia Virus-Induced Tumor |
RAW 264.7 |
小鼠单核巨噬 细胞白血病细胞 |
慢病毒 | 20 | HiTransG BP |
| 其他 | SP2/0 | 小鼠骨髓瘤细胞 | 慢病毒 | 20 | HiTransG BP |
| MR1 |
中国仓鼠X小鼠 B淋巴细胞杂交瘤 |
慢病毒 | 30 | HiTransG BP | |
| 35.1 |
小鼠B细胞x小鼠淋巴 瘤杂交瘤细胞抗CD2 |
慢病毒 | 50 | HiTransG BA | |
| OP9 | 小鼠骨髓基质细胞 | 慢病毒 | 30 | HiTransG BP | |
|
Wistar大鼠 骨髓MSC细胞 |
Wistar大鼠 骨髓MSC细胞 |
慢病毒 | 10 | HiTransG BP | |
|
Sprague Dawley (SD)大鼠骨髓MSC 细胞 |
Sprague Dawley (SD)大鼠骨髓 MSC细胞 |
慢病毒 | 20 | HiTransG BP | |
| MM.1S | 人IgA-I骨髓瘤细胞 | 慢病毒 | 20 | HiTransG BP |
慢病毒转染悬浮细胞全流程
慢病毒在悬浮细胞中的高效表现，离不开几步核心环节。从高质量病毒的包装开始，到通过滴度测定和MOI优化选择最佳感染条件，再到将病毒导入目标细胞，并进行适当的筛选和检测，每一步都环环相扣。通过这种设计，才能在保持悬浮细胞的健康状态下实现目的基因的稳定表达，让转染效果更可靠。
具体操作要点
慢病毒能在悬浮细胞转染中发挥很大优势，然而，为了进一步确保实验的稳定性与可重复性，具体的操作细节需要有精确的把控。掌握这五步，新手也能轻松上手。
1. 把细胞养到 “状态巅峰”
悬浮细胞的状态直接决定感染成败，这 3 点必须盯紧。
- ①细胞活率在 85% 以上时转染更稳。
- ②细胞看起来圆润、发亮就是好信号。容易聚团的细胞可以看看外圈细胞的光泽感来判断状态。
- ③感染前调整至 2×105-5×105 cells/mL，处于对数生长期的细胞最 “听话”。
2. 感染体系 “精准调参”
这一步是提高效率的关键，3 个参数必须优化。
- ①MOI 值：不是越高越好，建议先做梯度实验，选荧光最强的组。
- ②必加助染剂：Polybrene，像给病毒和细胞 “牵线搭桥”，5-10μg/mL 的浓度刚刚好，记得用 PBS 配制并过滤除菌哦！
- ③离心感染：效率翻倍的秘诀，室温下 800-1200g 离心 30-90min（不同细胞耐受力不同），离心力能让病毒和细胞 “贴贴” 更紧密！
3.感染后 “细心呵护”
- ①12-24h 换新鲜培养基：去掉残留病毒和 Polybrene，减少对细胞的毒性影响。
- ②换液别太 “狠”：保留一半旧培养基，避免离心换液损伤细胞。
4. 筛选 + 检测，大功告成
灵活调整筛选条件。若转染 24–48 h后荧光信号依旧较弱，可以延长感染时间或降低药筛浓度，以减少对细胞的应激反应。
FAQs
1、为什么慢病毒是悬浮细胞的 “天选之法”?
慢病毒转染法是借助慢病毒（逆转录病毒）作为载体，将外源基因导入目标细胞的基因编辑技术。通常是慢病毒感染细胞后，RNA 逆转录为 DNA 并整合到宿主基因组，从而实现外源基因稳定表达。常规转染方法在悬浮细胞面前容易 “翻车”，但慢病毒却能轻松 hold 住，全靠这 4 大 “超能力”：
- 相对较高的感染效率：慢病毒能够主动侵染绝大多数类型的细胞，不依赖贴壁状态，如Jurkat、Thp-1、Raji等难转染的悬浮细胞也能被感染。
- 整合能力稳定：病毒基因组能稳定整合到宿主细胞染色体上，实现目的基因的长期、稳定表达，特别适合需要如功能获得或缺失，构建稳转株等需要持续研究的实验。
- 对细胞伤害低：相较于电转法，病毒法作用于悬浮细胞时，能最大程度降低物理性损伤，为细胞提供更温和的处理环境。
- 容纳能力较强：常规载体装不下的大片段基因（≤8kb），慢病毒轻松拿捏，对于构建复杂表达盒（如带荧光标记 + 筛选基因的载体）简直是福音！
