CRISPR-Cas9载体包含一个大肠杆菌的复制起源，一个用于选择的b-内酰胺酶基因和一个用来促进sgRNA基因的插入和构建的PacI/Nt.BbvCI USER盒。用USER融合从质粒pFC334扩增出的两个PCR片段结合，将PgdpA和TtrpC序列控制的新sgRNA基因插入USER盒。由于基于核酶的释放策略，在sgRNA基因中有两个相互依赖的可变区域，允许在一个克隆步骤中将两个可变区域合并到sgRNA基因中。
参考文献：Nødvig CS, Nielsen JB, Kogle ME, Mortensen UH. A CRISPR-Cas9 System for Genetic Engineering of Filamentous Fungi. PLoS One. 2015 Jul 15;10(7):e0133085.
技术服务 Technology Services
联系我们
CONTACT US
-
0574-87917803
服务热线 -
testobio@163.com
邮箱
丝状真菌编辑系统构建
CRISPR-Cas9载体包含一个大肠杆菌的复制起源，一个用于选择的b-内酰胺酶基因和一个用来促进sgRNA基因的插入和构建的PacI/Nt.BbvCI USER盒。用USER融合从质粒pFC334扩增出的两个PCR片段结合，将PgdpA和TtrpC序列控制的新sgRNA基因插入USER盒。由于基于核酶的释放策略，在sgRNA基因中有两个相互依赖的可变区域，允许在一个克隆步骤中将两个可变区域合并到sgRNA基因中。
参考文献：Nødvig CS, Nielsen JB, Kogle ME, Mortensen UH. A CRISPR-Cas9 System for Genetic Engineering of Filamentous Fungi. PLoS One. 2015 Jul 15;10(7):e0133085.
