提取培养10h的E．coliSZ85总DNA为模板，以P1和P2为引物，扩增ldhL基因全长ORF，同时使其带有自身的启动子和调控系统。根据adhE基因序列设计特异性引物P3和P4，该对引物一端与adhE基因序列一致，另一端为卡那霉素抗性基因序列。以pKD4质粒为模板，进行PCR扩增，得到两端带有adhE同源臂的卡那霉素抗性基因片段。通过电转方法将扩增的卡那霉素抗性基因片段电转到L-阿拉伯糖诱导过的E．coliSZ470/pKD46感受态细胞中。
参考文献：赵锦芳,许丽媛,王永泽,赵筱,王金华. 利用五碳糖产高纯度L-乳酸的大肠杆菌基因工程菌的构建. 微生物学报, 2013, 53(4): 328-337
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利用五碳糖产高纯度L-乳酸的大肠杆菌基因工程菌的构建
提取培养10h的E．coliSZ85总DNA为模板，以P1和P2为引物，扩增ldhL基因全长ORF，同时使其带有自身的启动子和调控系统。根据adhE基因序列设计特异性引物P3和P4，该对引物一端与adhE基因序列一致，另一端为卡那霉素抗性基因序列。以pKD4质粒为模板，进行PCR扩增，得到两端带有adhE同源臂的卡那霉素抗性基因片段。通过电转方法将扩增的卡那霉素抗性基因片段电转到L-阿拉伯糖诱导过的E．coliSZ470/pKD46感受态细胞中。
参考文献：赵锦芳,许丽媛,王永泽,赵筱,王金华. 利用五碳糖产高纯度L-乳酸的大肠杆菌基因工程菌的构建. 微生物学报, 2013, 53(4): 328-337
