利用基于CRISPR/Cas9的基因组编辑技术构建CWP2基因破坏的菌株。首先在大肠杆菌DH5α中构建gRNA质粒。采用两次醋酸锂转化法[17]分别将Cas9质粒和gRNA质粒导入出发菌株Y294-BGL中，通过100mg/LG418和300mg/L潮霉素B筛选转化子。通过验证引物CWP2-C-F/R扩增转化元件，测序验证正确转化子，命名为Y294-Bcwp2△。
参考文献：李洁, 曾钰, 张明明, 白凤武, 赵心清. 破坏细胞壁蛋白CWP2基因提高重组酿酒酵母β-葡萄糖苷酶胞外酶活. 微生物学通报, 2020, 47(3): 681-690.
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破坏细胞壁蛋白 CWP2 基因提高重组酿酒酵母 β-葡萄糖苷酶胞外酶活
利用基于CRISPR/Cas9的基因组编辑技术构建CWP2基因破坏的菌株。首先在大肠杆菌DH5α中构建gRNA质粒。采用两次醋酸锂转化法[17]分别将Cas9质粒和gRNA质粒导入出发菌株Y294-BGL中，通过100mg/LG418和300mg/L潮霉素B筛选转化子。通过验证引物CWP2-C-F/R扩增转化元件，测序验证正确转化子，命名为Y294-Bcwp2△。
参考文献：李洁, 曾钰, 张明明, 白凤武, 赵心清. 破坏细胞壁蛋白CWP2基因提高重组酿酒酵母β-葡萄糖苷酶胞外酶活. 微生物学通报, 2020, 47(3): 681-690.
