对于nlpI基因的缺失，我们扩增了一个末端与nlpI基因上下游区域重叠的氯霉素抗性盒（末端重叠30bp）。用λ-red重组酶系统将dsDNA电穿孔到EcN细胞中。质粒pOGG005通过限制性酶切（PsiL和PacI）引入MCS位点进行修饰。然后设计一个具有J23119启动子的融合蛋白，然后是RBS、ClyA、UniProtKB 、TEV位点和Hy，并从IDT中获得了基因块。将质粒克隆到TOP10细胞中，然后在ΔE细胞中进行亚克隆，获得ΔECHy。
参考文献：Thomas SC, Madaan T, Kamble NS, Siddiqui NA, Pauletti GM, Kotagiri N. Engineered Bacteria Enhance Immunotherapy and Targeted Therapy through Stromal Remodeling of Tumors. Adv Healthc Mater. 2022 Jan;11(2):e2101487.
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对于nlpI基因的缺失，我们扩增了一个末端与nlpI基因上下游区域重叠的氯霉素抗性盒（末端重叠30bp）。用λ-red重组酶系统将dsDNA电穿孔到EcN细胞中。质粒pOGG005通过限制性酶切（PsiL和PacI）引入MCS位点进行修饰。然后设计一个具有J23119启动子的融合蛋白，然后是RBS、ClyA、UniProtKB 、TEV位点和Hy，并从IDT中获得了基因块。将质粒克隆到TOP10细胞中，然后在ΔE细胞中进行亚克隆，获得ΔECHy。
参考文献：Thomas SC, Madaan T, Kamble NS, Siddiqui NA, Pauletti GM, Kotagiri N. Engineered Bacteria Enhance Immunotherapy and Targeted Therapy through Stromal Remodeling of Tumors. Adv Healthc Mater. 2022 Jan;11(2):e2101487.
