从黑曲霉T基因中扩增Asp729T和Asp1072T，Tre686T和Tre1079T，通过基因合成获得MseT、CthT、MthT和TteT的核苷酸序列，分别用特异性引物扩增。将所有海藻酶基因片段与黑曲霉的glaA信号肽融合，用6×His标记取代其天然信号肽，以确保目标海藻酶的分泌，用于免疫印迹鉴定。获得的NEBuilder基因片段和杂交启动子PnaII/TPI通过Hif DNA组装主混合与UEV融合，并转化大肠杆菌Match 1T1生成质粒。
参考文献：Dong L, Lin X, Yu D, Huang L, Wang B, Pan L. High-level expression of highly active and thermostable trehalase from Myceliophthora thermophila in Aspergillus niger by using the CRISPR/Cas9 tool and its application in ethanol fermentation. J Ind Microbiol Biotechnol. 2020 Jan;47(1):133-144.
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从黑曲霉T基因中扩增Asp729T和Asp1072T，Tre686T和Tre1079T，通过基因合成获得MseT、CthT、MthT和TteT的核苷酸序列，分别用特异性引物扩增。将所有海藻酶基因片段与黑曲霉的glaA信号肽融合，用6×His标记取代其天然信号肽，以确保目标海藻酶的分泌，用于免疫印迹鉴定。获得的NEBuilder基因片段和杂交启动子PnaII/TPI通过Hif DNA组装主混合与UEV融合，并转化大肠杆菌Match 1T1生成质粒。
参考文献：Dong L, Lin X, Yu D, Huang L, Wang B, Pan L. High-level expression of highly active and thermostable trehalase from Myceliophthora thermophila in Aspergillus niger by using the CRISPR/Cas9 tool and its application in ethanol fermentation. J Ind Microbiol Biotechnol. 2020 Jan;47(1):133-144.
