CRISPR/Cas9系统的设计由Cas9 DNA内切酶和引导RNA（gRNA）组成。gRNA和Cas9质粒载体分别由p426-SNR52p-gRNA.CAN1.Y-SUP4t和p415-GalL-Cas9-CYC1t修饰而成。使用PCR和酵母重组构建gRNA、Cas9和供体载体。Cas9与构巢曲霉的trpC（AN0648）启动子融合，随后是构巢曲霉SV40核定位信号（NLS）结构域和trpC终止序列。gRNA与酿酒酵母的gRNA 52启动子融合，包括特定的20个碱基对靶序列，随后是gRNA结构成分和SUP4侧翼区。
参考文献：Matsu-ura, T., Baek, M., Kwon, J. et al. Efficient gene editing in Neurospora crassa with CRISPR technology. Fungal Biol Biotechnol 2, 4 (2015).
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CRISPR/Cas9系统的设计由Cas9 DNA内切酶和引导RNA（gRNA）组成。gRNA和Cas9质粒载体分别由p426-SNR52p-gRNA.CAN1.Y-SUP4t和p415-GalL-Cas9-CYC1t修饰而成。使用PCR和酵母重组构建gRNA、Cas9和供体载体。Cas9与构巢曲霉的trpC（AN0648）启动子融合，随后是构巢曲霉SV40核定位信号（NLS）结构域和trpC终止序列。gRNA与酿酒酵母的gRNA 52启动子融合，包括特定的20个碱基对靶序列，随后是gRNA结构成分和SUP4侧翼区。
参考文献：Matsu-ura, T., Baek, M., Kwon, J. et al. Efficient gene editing in Neurospora crassa with CRISPR technology. Fungal Biol Biotechnol 2, 4 (2015).
