从朱红密孔菌提取总RNA，用上标逆转录酶和oligo引物进行cDNA第一链合成。使用特定引物扩增全长cdh cDNA，由Pfu DNA聚合酶产生的PCR扩增片段被钝化，为了在片段上增加A-tail，使用Taq DNA聚合酶。用Qiaquick凝胶提取试剂盒纯化片段后插入到pGEMT easy质粒中。将克隆到pGEMT easy载体中的cdh cDNA用EcoRI和XbaI酶切，用Qiaquick凝胶提取试剂盒纯化。同时，用相同的限制性内切酶将pPICZaA线性化，并将cdh cDNA，酵母a分泌因子和c-term-（His）6标签编码序列在相应的位点连接到pPICZaA上。
参考文献：Bey M, Berrin JG, Poidevin L, Sigoillot JC. Heterologous expression of Pycnoporus cinnabarinus cellobiose dehydrogenase in Pichia pastoris and involvement in saccharification processes. Microb Cell Fact. 2011 Dec 28;10:113.
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从朱红密孔菌提取总RNA，用上标逆转录酶和oligo引物进行cDNA第一链合成。使用特定引物扩增全长cdh cDNA，由Pfu DNA聚合酶产生的PCR扩增片段被钝化，为了在片段上增加A-tail，使用Taq DNA聚合酶。用Qiaquick凝胶提取试剂盒纯化片段后插入到pGEMT easy质粒中。将克隆到pGEMT easy载体中的cdh cDNA用EcoRI和XbaI酶切，用Qiaquick凝胶提取试剂盒纯化。同时，用相同的限制性内切酶将pPICZaA线性化，并将cdh cDNA，酵母a分泌因子和c-term-（His）6标签编码序列在相应的位点连接到pPICZaA上。
参考文献：Bey M, Berrin JG, Poidevin L, Sigoillot JC. Heterologous expression of Pycnoporus cinnabarinus cellobiose dehydrogenase in Pichia pastoris and involvement in saccharification processes. Microb Cell Fact. 2011 Dec 28;10:113.
