由于去除每个菌毛操纵子可以促进大肠杆菌的细胞生长和PHA的生物合成，因此在大肠杆菌MG1655的染色体中，所有12个CU操纵子均缺失，导致菌毛缺陷菌株WQM026。使用CRISPR-Cas9方法从MG1655基因组中敲除基因簇，用引物F1-yagV-Z/R1-yagV-Z和F2-yagV-Z/R2-yyagV-Z对上游和下游臂片段进行PCR扩增。这两个PCR产物用凝胶提取试剂盒回收，并用引物F1-yagV-Z/R2-yagV-Z重叠，得到供体DNA。将纯化的供体DNA和pTargetF0混合电穿孔到感受态细胞中。将转化的细胞复苏后铺在含有壮观霉素和卡那霉素的LB琼脂平板上。孵育后使用F1-yagV-Z/R2-yagV-Z通过菌落PCR确认正确的重组菌株。然后通过IPTG过夜诱导使pTargetF01质粒固化并去除pCas质粒。用相同的方法依次敲除所有12个菌毛操作，共去除64个基因构建WQM026。
参考文献：Qiao J, Tan X, Ren H, Wu Z, Hu X, Wang X. Construction of an Escherichia coli Strain Lacking Fimbriae by Deleting 64 Genes and Its Application for Efficient Production of Poly(3-Hydroxybutyrate) and l-Threonine. Appl Environ Microbiol. 2021 May 26;87(12):e0038121.
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由于去除每个菌毛操纵子可以促进大肠杆菌的细胞生长和PHA的生物合成，因此在大肠杆菌MG1655的染色体中，所有12个CU操纵子均缺失，导致菌毛缺陷菌株WQM026。使用CRISPR-Cas9方法从MG1655基因组中敲除基因簇，用引物F1-yagV-Z/R1-yagV-Z和F2-yagV-Z/R2-yyagV-Z对上游和下游臂片段进行PCR扩增。这两个PCR产物用凝胶提取试剂盒回收，并用引物F1-yagV-Z/R2-yagV-Z重叠，得到供体DNA。将纯化的供体DNA和pTargetF0混合电穿孔到感受态细胞中。将转化的细胞复苏后铺在含有壮观霉素和卡那霉素的LB琼脂平板上。孵育后使用F1-yagV-Z/R2-yagV-Z通过菌落PCR确认正确的重组菌株。然后通过IPTG过夜诱导使pTargetF01质粒固化并去除pCas质粒。用相同的方法依次敲除所有12个菌毛操作，共去除64个基因构建WQM026。
参考文献：Qiao J, Tan X, Ren H, Wu Z, Hu X, Wang X. Construction of an Escherichia coli Strain Lacking Fimbriae by Deleting 64 Genes and Its Application for Efficient Production of Poly(3-Hydroxybutyrate) and l-Threonine. Appl Environ Microbiol. 2021 May 26;87(12):e0038121.
