在TWF063染色体中的 lacI位点插入cysH启动子控制的aspC基因和RBSs7得到TWF066。使用引物以TWF001基因组模板PCR扩增RBSs7-aspC片段和cysH启动子片段,用重叠PCR将两个片段进行连接,得到PcysH-RBSs7-aspC。利用TWF001在TWF001染色体中的 lacI位点插入cysJ启动子控制的aspC基因和RBSs8得到TWF067。使用引物以TWF001基因组模板PCR扩增RBSs8-aspC片段和cysH启动子片段,用重叠PCR将两个片段进行连接,得到PcysJ-RBSs8-aspC。TWF001染色体中的 lacI位点插入cysD启动子控制的aspC基因和RBSs9得到TWF068。使用引物以TWF001基因组模板PCR扩增RBSs9-aspC片段和cysH启动子片段,用重叠PCR将两个片段进行连接,得到PcysD-RBSs9-aspC。

参考文献:Zhao L, Lu Y, Yang J, Fang Y, Zhu L, Ding Z, Wang C, Ma W, Hu X, Wang X. Expression regulation of multiple key genes to improve L-threonine in Escherichia coli. Microb Cell Fact. 2020 Feb 24;19(1):46.
在TWF063染色体中的 lacI位点插入cysH启动子控制的aspC基因和RBSs7得到TWF066。使用引物以TWF001基因组模板PCR扩增RBSs7-aspC片段和cysH启动子片段,用重叠PCR将两个片段进行连接,得到PcysH-RBSs7-aspC。利用TWF001在TWF001染色体中的 lacI位点插入cysJ启动子控制的aspC基因和RBSs8得到TWF067。使用引物以TWF001基因组模板PCR扩增RBSs8-aspC片段和cysH启动子片段,用重叠PCR将两个片段进行连接,得到PcysJ-RBSs8-aspC。TWF001染色体中的 lacI位点插入cysD启动子控制的aspC基因和RBSs9得到TWF068。使用引物以TWF001基因组模板PCR扩增RBSs9-aspC片段和cysH启动子片段,用重叠PCR将两个片段进行连接,得到PcysD-RBSs9-aspC。

参考文献:Zhao L, Lu Y, Yang J, Fang Y, Zhu L, Ding Z, Wang C, Ma W, Hu X, Wang X. Expression regulation of multiple key genes to improve L-threonine in Escherichia coli. Microb Cell Fact. 2020 Feb 24;19(1):46.