使用带有目标基因同源侧翼区域作为缺失盒，用pyrG当做标记基因。通过表达Cas9的AMA质粒pFC-332和潮霉素的可选择标记hyg，使用了两种体外合成的sgrna与as9质粒和缺失盒一起转化。缺失盒通过同源重组整合后，将在基因的位置引入pyrG。
参考文献：Kuivanen J, Wang YJ, Richard P. Engineering Aspergillus niger for galactaric acid production: elimination of galactaric acid catabolism by using RNA sequencing and CRISPR/Cas9. Microb Cell Fact. 2016 Dec 12;15(1):210.
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利用黑曲霉生产半乳糖酸的工程
使用带有目标基因同源侧翼区域作为缺失盒，用pyrG当做标记基因。通过表达Cas9的AMA质粒pFC-332和潮霉素的可选择标记hyg，使用了两种体外合成的sgrna与as9质粒和缺失盒一起转化。缺失盒通过同源重组整合后，将在基因的位置引入pyrG。
参考文献：Kuivanen J, Wang YJ, Richard P. Engineering Aspergillus niger for galactaric acid production: elimination of galactaric acid catabolism by using RNA sequencing and CRISPR/Cas9. Microb Cell Fact. 2016 Dec 12;15(1):210.
