Pkd46red为介导，在大肠杆菌ITHR菌株体内以带56bp同源臂的cat基因线性打靶序列替换其染色体上的metA目的基因，通过氯霉素抗性筛选获得重组子ITHR△metA::cat。在第二轮体内重组过程中，将编码ＦＬＰ位点特异性重组酶的质粒pCP20转入突变菌株ITHR△metA::cat，在含氨苄青霉素抗性的50mg/l平板上培养，菌落PCR筛选ITHR△metA阳性重组子。并在已敲除菌株ITHR△metA基础上转入pKD46再敲除ilvA基因，构建双敲除菌ITHR△metA△ilvA。
参考文献：闫继爱 张雪 张芸 左佃光 陈宁 温廷益. 利用Red同源重组技术构建产L-苏氨酸的基因工程菌[J]. 中国生物工程杂志, 2010, 30(03): 79-84
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利用RED同源重组技术构建产Ｌ-苏氨酸的基因工程菌
Pkd46red为介导，在大肠杆菌ITHR菌株体内以带56bp同源臂的cat基因线性打靶序列替换其染色体上的metA目的基因，通过氯霉素抗性筛选获得重组子ITHR△metA::cat。在第二轮体内重组过程中，将编码ＦＬＰ位点特异性重组酶的质粒pCP20转入突变菌株ITHR△metA::cat，在含氨苄青霉素抗性的50mg/l平板上培养，菌落PCR筛选ITHR△metA阳性重组子。并在已敲除菌株ITHR△metA基础上转入pKD46再敲除ilvA基因，构建双敲除菌ITHR△metA△ilvA。
参考文献：闫继爱 张雪 张芸 左佃光 陈宁 温廷益. 利用Red同源重组技术构建产L-苏氨酸的基因工程菌[J]. 中国生物工程杂志, 2010, 30(03): 79-84
