使用Ambion RNA提取试剂盒提取Periconia sp。总RNA，并使用Fermentas first strand cDNA synthe sis试剂盒构建cDNA。通过PCR扩增2601 bp bgl1基因。里氏木霉纤维生物水解酶I（cbh1）终止子区域用作终止子。使用cbh1引物和里氏木霉QM9414染色体DNA作为模板，通过PCR扩增了cbh1终止子。使用bgl1和cbh1 PCR产物作为模板，通过使用bgl1-cbh1融合引物的融合PCR将cbh1终止子融合到bgl1基因的3'端。凝胶提取融合的PCR产物，并将其用作融合克隆的模板到ClaI线性化的pPtef1-hph载体中，使用In-FusionW Advantage PCR克隆试剂盒生成pPtef1-bgl1-cbh1。
参考文献：Dashtban M, Qin W. Overexpression of an exotic thermotolerant β-glucosidase in trichoderma reesei and its significant increase in cellulolytic activity and saccharification of barley straw. Microb Cell Fact. 2012 May 20;11:63.
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使用Ambion RNA提取试剂盒提取Periconia sp。总RNA，并使用Fermentas first strand cDNA synthe sis试剂盒构建cDNA。通过PCR扩增2601 bp bgl1基因。里氏木霉纤维生物水解酶I（cbh1）终止子区域用作终止子。使用cbh1引物和里氏木霉QM9414染色体DNA作为模板，通过PCR扩增了cbh1终止子。使用bgl1和cbh1 PCR产物作为模板，通过使用bgl1-cbh1融合引物的融合PCR将cbh1终止子融合到bgl1基因的3'端。凝胶提取融合的PCR产物，并将其用作融合克隆的模板到ClaI线性化的pPtef1-hph载体中，使用In-FusionW Advantage PCR克隆试剂盒生成pPtef1-bgl1-cbh1。
参考文献：Dashtban M, Qin W. Overexpression of an exotic thermotolerant β-glucosidase in trichoderma reesei and its significant increase in cellulolytic activity and saccharification of barley straw. Microb Cell Fact. 2012 May 20;11:63.
