使用Pwo Super yield DNA聚合酶和特异性引物(包括限制性位点)通过PCR扩增DNA。将扩增的片段亚克隆到pCRII-TOPO载体中。将扩增的片段与酵母分泌因子和C-末端-His6标签编码序列同框，在相应位点插入载体pPICZ A或pPICZ C中。将所得重组表达质粒用PmeI线性化，并通过电穿孔转化到巴斯德毕赤酵母X-33中。
参考文献：Couturier M, Haon M, Coutinho PM, Henrissat B, Lesage-Meessen L, Berrin JG. Podospora anserina hemicellulases potentiate the Trichoderma reesei secretome for saccharification of lignocellulosic biomass. Appl Environ Microbiol. 2011 Jan;77(1):237-46.
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使用Pwo Super yield DNA聚合酶和特异性引物(包括限制性位点)通过PCR扩增DNA。将扩增的片段亚克隆到pCRII-TOPO载体中。将扩增的片段与酵母分泌因子和C-末端-His6标签编码序列同框，在相应位点插入载体pPICZ A或pPICZ C中。将所得重组表达质粒用PmeI线性化，并通过电穿孔转化到巴斯德毕赤酵母X-33中。
参考文献：Couturier M, Haon M, Coutinho PM, Henrissat B, Lesage-Meessen L, Berrin JG. Podospora anserina hemicellulases potentiate the Trichoderma reesei secretome for saccharification of lignocellulosic biomass. Appl Environ Microbiol. 2011 Jan;77(1):237-46.
