将密码子优化的gdh基因和天然谷氨酸脱氢酶基因（cgdh）置于P43启动子的下游，使用EcoRI和XbaI的限制性酶切位点连接到pHT315质粒中，产生质粒pHT315-gdh和pHT315-cgdh。将xylR基因置于Pgrac启动子的下游，连接到pHT01的BamHI位点，产生质粒pHT01-xylR。Pxyl启动子（来自pWH1520的木糖诱导型启动子）被置于bgaB基因的上游，并连接到pCB的KpnI和SalI位点，产生质粒pCB-Pxyl。为了控制odhAB基因表达，通过无标记基因操作方法将Pxyl前体或PO1启动子单独插入NK-1菌株odhA基因的上游。为了避免其天然PodhAB启动子的泄漏表达，将枯草芽孢杆菌spoVG基因转录终止子整合到PodhAB前体下游和新插入的启动子（Pxyl或PO1）上游的染色体中。
参考文献：Feng J, Quan Y, Gu Y, Liu F, Huang X, Shen H, Dang Y, Cao M, Gao W, Lu X, Wang Y, Song C, Wang S. Enhancing poly-γ-glutamic acid production in Bacillus amyloliquefaciens by introducing the glutamate synthesis features from Corynebacterium glutamicum. Microb Cell Fact. 2017 May 22;16(1):88.
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将密码子优化的gdh基因和天然谷氨酸脱氢酶基因（cgdh）置于P43启动子的下游，使用EcoRI和XbaI的限制性酶切位点连接到pHT315质粒中，产生质粒pHT315-gdh和pHT315-cgdh。将xylR基因置于Pgrac启动子的下游，连接到pHT01的BamHI位点，产生质粒pHT01-xylR。Pxyl启动子（来自pWH1520的木糖诱导型启动子）被置于bgaB基因的上游，并连接到pCB的KpnI和SalI位点，产生质粒pCB-Pxyl。为了控制odhAB基因表达，通过无标记基因操作方法将Pxyl前体或PO1启动子单独插入NK-1菌株odhA基因的上游。为了避免其天然PodhAB启动子的泄漏表达，将枯草芽孢杆菌spoVG基因转录终止子整合到PodhAB前体下游和新插入的启动子（Pxyl或PO1）上游的染色体中。
参考文献：Feng J, Quan Y, Gu Y, Liu F, Huang X, Shen H, Dang Y, Cao M, Gao W, Lu X, Wang Y, Song C, Wang S. Enhancing poly-γ-glutamic acid production in Bacillus amyloliquefaciens by introducing the glutamate synthesis features from Corynebacterium glutamicum. Microb Cell Fact. 2017 May 22;16(1):88.
