为了生产乳酸，将含有Bos Taurus ldh密码子优化基因的质粒pGAPZB用AvrII限制性内切酶线性化，并通过同源重组整合到巴斯德毕赤酵母X-33染色体DNA中得到菌株命名为X。为了评估乳酸转运蛋白对产生LDH的巴斯德毕赤酵母菌株的影响，使用了pPICPGKGFP质粒。pPICPGKGFP含有编码酿酒酵母乳酸转运蛋白Jen1p的密码子优化基因或编码巴斯德毕赤酵母Pas推定转运蛋白的密码子最优化基因，分别得到质粒pPGK-JEN和pPGK-Pas。使用限制性内切酶BglII（Life 将质粒pPGK-JEN和pPGK-PAS整合到GS115（his4）菌株中。在不含氨基酸的YNB固体培养基中筛选阳性克隆，所得菌株分别命名为GJ和GS。
参考文献：de Lima PB, Mulder KC, Melo NT, Carvalho LS, Menino GS, Mulinari E, de Castro VH, Dos Reis TF, Goldman GH, Magalhães BS, Parachin NS. Novel homologous lactate transporter improves L-lactic acid production from glycerol in recombinant strains of Pichia pastoris. Microb Cell Fact. 2016 Sep 15;15(1):158.
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为了生产乳酸，将含有Bos Taurus ldh密码子优化基因的质粒pGAPZB用AvrII限制性内切酶线性化，并通过同源重组整合到巴斯德毕赤酵母X-33染色体DNA中得到菌株命名为X。为了评估乳酸转运蛋白对产生LDH的巴斯德毕赤酵母菌株的影响，使用了pPICPGKGFP质粒。pPICPGKGFP含有编码酿酒酵母乳酸转运蛋白Jen1p的密码子优化基因或编码巴斯德毕赤酵母Pas推定转运蛋白的密码子最优化基因，分别得到质粒pPGK-JEN和pPGK-Pas。使用限制性内切酶BglII（Life 将质粒pPGK-JEN和pPGK-PAS整合到GS115（his4）菌株中。在不含氨基酸的YNB固体培养基中筛选阳性克隆，所得菌株分别命名为GJ和GS。
参考文献：de Lima PB, Mulder KC, Melo NT, Carvalho LS, Menino GS, Mulinari E, de Castro VH, Dos Reis TF, Goldman GH, Magalhães BS, Parachin NS. Novel homologous lactate transporter improves L-lactic acid production from glycerol in recombinant strains of Pichia pastoris. Microb Cell Fact. 2016 Sep 15;15(1):158.
