细胞点突变
细胞点突变的含义
核转染法将gRNA-Cas9 RNP复合物与携带目标点突变的单链Oligo（ssODN）共转入细胞 -> 极限稀释法分离单克隆。
RNP 在靶位点产生DNA双链断裂后，细胞以Oligo为模板进行同源重组修复（HDR），把目标点突变精准写入基因组 -> 扩增子测序验证，筛出阳性克隆。
泰斯拓生物独家升级:TESTO-HMax
周期调控：H+分子可逆阻滞G1/S检查点，使更多细胞同步进入S/G2期（HDR窗口期）
通路偏好：抑制 NHEJ 关键蛋白招募，indel 占比显著下降
效率跃升：Cell Pool水平HDR基因型占比最高可达 84%，比常规方法提高10倍以上
结果交付：
PCR + Sanger 双峰验证，提供完整测序峰图；可选 NGS 深度扫描，突变检出限 ≥1%。
承诺：HDR 阳性克隆若低于合同指标，免费重做直至达标。
基因点突变服务详情
细胞类型
- 肿瘤细胞
- 常规细胞系
方案类型
- RNP法、先导编辑器
- 单碱基编辑器、质粒抗性法
交付成果
- 点突变阳性克隆
周期/价格
- 在线咨询
点突变方案
| 方法 | RNP法 | Prime Editing |
|---|---|---|
| 载体需求 | 无需 | 均可 |
| 优势 | 效果快，操作简单，不需要进行载体构建 | 可实现多类型点突变，脱靶风险低，可操作性强 |
| 劣势 | 需要突变的位点位于gRNA位点附近，不适用于低HDR效率或难转染细胞类型 | 设计结构复杂，周期长位点收到PAM区限制 |
| 针对需求 | 突变位点合适，仅对少量碱基突变 | 突变位点合适，需要进行小片段插入或缺失 |
服务流程及方案适配
FAQs
1. 基因点突变细胞系是什么？有哪些类型？
基因点突变细胞系（Gene Point-Mutation Cell Line）是指在基因组特定位点精确引入单碱基或数个碱基替换/插入/缺失的细胞群体，用于模拟人类 SNP、驱动突变或耐药突变，研究功能获得（GOF）或功能缺失（LOF）。 按突变复杂度可分为：
- (1) 单碱基替换（C→T、A→G 等）
- (2) 多碱基替换/插入（3-24 nt）
- (3) 复杂或重复序列修正（≤50 nt）
2. 点突变细胞系构建周期一般多久？
| 方法 | 周期 | 备注 |
|---|---|---|
| RNP-ssODN（TESTO-HRex™） | 3-4 周 | HDR 阳性 Pool≥80%，一周出克隆 |
| Prime Editing（PE） | 5-6 周 | 复杂突变首选，效率略低 |
| 单碱基编辑器（CBE/ABE） | 2-3 周 | 仅适用 4 种碱基转换 |
| 质粒抗性法 | 6-8 周 | 无合适 gRNA 时备用，含药筛 |
3.为什么选择泰斯拓生物基因点突变服务？
- TESTO-HRex™ 平台：自主H+调控分子，同步细胞周期至S/G2，HDR占比最高84%，比传统方法提升10倍
- 双交付标准：PCR+Sanger双峰验证，可选NGS深度扫描，突变纯度≥95%
- 周期快：现货300+常见突变细胞系1周发货；定制项目3-4周拿到阳性克隆
- 风险兜底：HDR阳性率未达合同指标，免费重做直至达标
4.TESTO-HRex™ 与传统的 CRISPR/Cas9 技术有何不同？
| 维度 | 传统 CRISPR/Cas9 | TESTO-HRex™ |
|---|---|---|
| 断裂类型 | 双链断裂（DSB） | 依旧利用 DSB，但重编程修复偏好 |
| 修复途径 | NHEJ 占 70-90%，indel 高 | H+ 分子抑制 NHEJ，HDR 提升至 84% |
| 突变精度 | 随机 indel 多，需大量克隆 | 突变克隆一次性占比>80% |
| 实验周期 | 6-8 周筛克隆 | 3-4 周 完成交付 |
| 脱靶风险 | 依赖 gRNA 质量 | 保持原 Cas9 高特异性，无额外脱靶 |
一句话总结：TESTO-HRex™ 保留 CRISPR 易设计优势，却把“随机修复”变成“定向修复”，让点突变像转染一样简单。
