想利用长引物来引入一段序列,结果构建出来的载体中,长引物引入的序列发生了部分缺失或突变
(1)引物合成太长,容易出现错误,合成过程中引物序列不对
(2)如果引物合成没有问题,扩增过程中出现问题(用高保真酶可以解决)
(3)如果扩增也没问题,转化后在细菌内出现重组之类,导致序列发生改变
(4)序列没有错误,测序离引物太近,测序出现问题
如果是pcr插入序列,长度不能太长,一次10bp左右差不多,太长要分几次
想利用长引物来引入一段序列,结果构建出来的载体中,长引物引入的序列发生了部分缺失或突变
(1)引物合成太长,容易出现错误,合成过程中引物序列不对
(2)如果引物合成没有问题,扩增过程中出现问题(用高保真酶可以解决)
(3)如果扩增也没问题,转化后在细菌内出现重组之类,导致序列发生改变
(4)序列没有错误,测序离引物太近,测序出现问题
如果是pcr插入序列,长度不能太长,一次10bp左右差不多,太长要分几次
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