从数据库中获得黄曲霉尿酸氧化酶基因序列，并根据巴斯德毕赤酵母密码子使用情况优化密码子。为了表达具有天然N末端的尿酸氧化酶蛋白，使用表达载体pPICZαa的XhoI位点克隆与Kex2切割位点齐平。序列被包含在尿酸氧化酶基因序列的上游，聚组氨酸（6X）标签序列被添加到尿酸氧化酶基因的下游，位于终止密码子之前。修饰的合成基因以环状质粒pGH-UOX的形式提供，含有定向克隆到pPICZαa所需的所有限制性位点。用XhoI/XbaI双酶切法从pGH-UOX中切出尿酸氧化酶基因，随后克隆到pPICZαA的XhoI/XbaI位点。最终构建物被称为pPICZαA-UOX。
参考文献：Fazel R, Zarei N, Ghaemi N, Namvaran MM, Enayati S, Mirabzadeh Ardakani E, Azizi M, Khalaj V. Cloning and expression of Aspergillus flavus urate oxidase in Pichia pastoris. Springerplus. 2014 Jul 30;3:395.
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从数据库中获得黄曲霉尿酸氧化酶基因序列，并根据巴斯德毕赤酵母密码子使用情况优化密码子。为了表达具有天然N末端的尿酸氧化酶蛋白，使用表达载体pPICZαa的XhoI位点克隆与Kex2切割位点齐平。序列被包含在尿酸氧化酶基因序列的上游，聚组氨酸（6X）标签序列被添加到尿酸氧化酶基因的下游，位于终止密码子之前。修饰的合成基因以环状质粒pGH-UOX的形式提供，含有定向克隆到pPICZαa所需的所有限制性位点。用XhoI/XbaI双酶切法从pGH-UOX中切出尿酸氧化酶基因，随后克隆到pPICZαA的XhoI/XbaI位点。最终构建物被称为pPICZαA-UOX。
参考文献：Fazel R, Zarei N, Ghaemi N, Namvaran MM, Enayati S, Mirabzadeh Ardakani E, Azizi M, Khalaj V. Cloning and expression of Aspergillus flavus urate oxidase in Pichia pastoris. Springerplus. 2014 Jul 30;3:395.
