通过PCR从P.stipitis CBS6054的基因组DNA中扩增出P.stipittis ADH1基因，用NcoI和XhoI消化扩增的片段，并将其连接到pVR1的NcoI与XhoI片段上，该片段含有与酿酒酵母CYC1终止子连接的瑞士乳杆菌的L-乳酸脱氢酶编码基因（ldhL）。用ApaI和XhoI切割得到的质粒pMI343并连接到pJM6的ApaI-XhoI片段，该片段含有P.stipitis URA3基因和自主复制序列（PsARS2），形成pMI344。
参考文献：Ilmén M, Koivuranta K, Ruohonen L, Suominen P, Penttilä M. Efficient production of L-lactic acid from xylose by Pichia stipitis. Appl Environ Microbiol. 2007 Jan;73(1):117-23.
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通过PCR从P.stipitis CBS6054的基因组DNA中扩增出P.stipittis ADH1基因，用NcoI和XhoI消化扩增的片段，并将其连接到pVR1的NcoI与XhoI片段上，该片段含有与酿酒酵母CYC1终止子连接的瑞士乳杆菌的L-乳酸脱氢酶编码基因（ldhL）。用ApaI和XhoI切割得到的质粒pMI343并连接到pJM6的ApaI-XhoI片段，该片段含有P.stipitis URA3基因和自主复制序列（PsARS2），形成pMI344。
参考文献：Ilmén M, Koivuranta K, Ruohonen L, Suominen P, Penttilä M. Efficient production of L-lactic acid from xylose by Pichia stipitis. Appl Environ Microbiol. 2007 Jan;73(1):117-23.
