为了构建基因缺陷突变体，将含有质粒pRE112-ΔbudB、pRE111-ΔackA或pRE112--ΔadhE的大肠杆菌菌株χ7213用作与肺炎克雷伯菌结合的供体。使用自杀载体pRE112通过等位基因交换将突变片段引入肺炎克雷伯菌，并进行双重重组以获得突变体。对于第一次重组，将野生肺炎克雷伯菌与大肠杆菌χ7213（pRE112-ΔbudB）在Luria-Bertani（LB）培养基中孵育过夜，然后在LB板上用30mg/L氯霉素进行选择，然后用引物ID-pRE112和1384进行PCR验证。将正确的重组体在LB培养基中孵育过夜进行第二次重组，然后在10%蔗糖板上培养进行选择，通过PCR进行验证。
参考文献：Feng X, Jiang L, Han X, Liu X, Zhao Z, Liu H, Xian M, Zhao G. Production of D-lactate from glucose using Klebsiella pneumoniae mutants. Microb Cell Fact. 2017 Nov 21;16(1):209.
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为了构建基因缺陷突变体，将含有质粒pRE112-ΔbudB、pRE111-ΔackA或pRE112--ΔadhE的大肠杆菌菌株χ7213用作与肺炎克雷伯菌结合的供体。使用自杀载体pRE112通过等位基因交换将突变片段引入肺炎克雷伯菌，并进行双重重组以获得突变体。对于第一次重组，将野生肺炎克雷伯菌与大肠杆菌χ7213（pRE112-ΔbudB）在Luria-Bertani（LB）培养基中孵育过夜，然后在LB板上用30mg/L氯霉素进行选择，然后用引物ID-pRE112和1384进行PCR验证。将正确的重组体在LB培养基中孵育过夜进行第二次重组，然后在10%蔗糖板上培养进行选择，通过PCR进行验证。
参考文献：Feng X, Jiang L, Han X, Liu X, Zhao Z, Liu H, Xian M, Zhao G. Production of D-lactate from glucose using Klebsiella pneumoniae mutants. Microb Cell Fact. 2017 Nov 21;16(1):209.
