RofumR、TbFRDg和AnDCT-02的密码子优化编码序列分别从Termo Fisher Scientifc和Gen Scrip获得。Mdh3和Frd通过在PCR扩增过程中省略最后9个bp而靶向细胞质，从而从蛋白质中去除过氧化物酶体靶向信号（SKL）（相应的编码序列命名为Mdh3-R和TbFRDg-R）。使用Gibson等温组装在pUC18中组装了JEN1启动子和IDP1终止子控制下的酿酒酵母MDH3-R盒、HOR7启动子和DIT1终止子控制的RofumR盒、FBA1启动子和ADH1终止剂控制下的TbFRDg R盒和COX7启动子与CYC1终止子控制之下的AnDCT-02盒[25]。RofumR、TbFRDg-R和AnDCT-02的编码序列分别从不带STOP的质粒pMA-T-RofumR、pOK-RQ-TbFRDg-R和pUC18-AnDCT-02-中扩增出来。从酿酒酵母CEN菌株分离的基因组DNA中扩增ScMDH3-R的编码序列以及所有启动子和终止子。PK113-7D UBR2JL1 GUT1JL1。
参考文献：Malubhoy Z, Bahia FM, de Valk SC, de Hulster E, Rendulić T, Ortiz JPR, Xiberras J, Klein M, Mans R, Nevoigt E. Carbon dioxide fixation via production of succinic acid from glycerol in engineered Saccharomyces cerevisiae. Microb Cell Fact. 2022 May 28;21(1):102.
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RofumR、TbFRDg和AnDCT-02的密码子优化编码序列分别从Termo Fisher Scientifc和Gen Scrip获得。Mdh3和Frd通过在PCR扩增过程中省略最后9个bp而靶向细胞质，从而从蛋白质中去除过氧化物酶体靶向信号（SKL）（相应的编码序列命名为Mdh3-R和TbFRDg-R）。使用Gibson等温组装在pUC18中组装了JEN1启动子和IDP1终止子控制下的酿酒酵母MDH3-R盒、HOR7启动子和DIT1终止子控制的RofumR盒、FBA1启动子和ADH1终止剂控制下的TbFRDg R盒和COX7启动子与CYC1终止子控制之下的AnDCT-02盒[25]。RofumR、TbFRDg-R和AnDCT-02的编码序列分别从不带STOP的质粒pMA-T-RofumR、pOK-RQ-TbFRDg-R和pUC18-AnDCT-02-中扩增出来。从酿酒酵母CEN菌株分离的基因组DNA中扩增ScMDH3-R的编码序列以及所有启动子和终止子。PK113-7D UBR2JL1 GUT1JL1。
参考文献：Malubhoy Z, Bahia FM, de Valk SC, de Hulster E, Rendulić T, Ortiz JPR, Xiberras J, Klein M, Mans R, Nevoigt E. Carbon dioxide fixation via production of succinic acid from glycerol in engineered Saccharomyces cerevisiae. Microb Cell Fact. 2022 May 28;21(1):102.
