以pTrcHis B和pZA23MCS为模板，PCR扩增trc启动子和不含启动子区的pZA23的核苷酸序列。扩增片段相互融合，所得质粒命名为pZA23trc。将kivd和adhA的合成基因片段分别直接克隆到pZE12MCS的KpnI和HindIII位点，得到的质粒命名为pZka。随后，以pZka和pTrcHis B为模板，PCR扩增kivd和adhA的基因集以及pTrcHisB的质粒片段。将扩增的片段彼此融合，得到的质粒被命名为pTka。以枯草芽孢杆菌基因组DNA和pZA23trc为模板，通过PCR扩增alsS和pZA23-trc片段。将扩增的片段融合在一起，得到的质粒被命名为p23S。随后，以大肠杆菌K-12 MG1655基因组DNA为模板，通过PCR扩增ilvC和ilvD的基因集，克隆到p23S的sacI位点，得到的质粒命名为p23SCD。使用大肠杆菌K-12 MG1655基因组DNA和pSAK作为模板，通过PCR扩增pgl和pSAK片段。将扩增的片段融合在一起，所得质粒被标记为pSp。以大肠杆菌K-12 MG1655基因组DNA为模板，通过PCR扩增zwf，将扩增片段克隆到pSp的kpnI位点，得到的质粒命名为pSzp。以大肠杆菌K-12 MG1655基因组DNA为模板，通过PCR扩增edd和eda。以edd和eda的扩增片段为tem板，通过PCR扩增edd和eda的基因集。将Te扩增片段克隆到pSzp的bamHI位点，将得到的质粒命名为pSzpee。
参考文献：Noda S, Mori Y, Oyama S, Kondo A, Araki M, Shirai T. Reconstruction of metabolic pathway for isobutanol production in Escherichia coli. Microb Cell Fact. 2019 Jul 18;18(1):124.
技术服务 Technology Services
联系我们
CONTACT US
-
0574-87917803
服务热线 -
testobio@163.com
邮箱
以pTrcHis B和pZA23MCS为模板，PCR扩增trc启动子和不含启动子区的pZA23的核苷酸序列。扩增片段相互融合，所得质粒命名为pZA23trc。将kivd和adhA的合成基因片段分别直接克隆到pZE12MCS的KpnI和HindIII位点，得到的质粒命名为pZka。随后，以pZka和pTrcHis B为模板，PCR扩增kivd和adhA的基因集以及pTrcHisB的质粒片段。将扩增的片段彼此融合，得到的质粒被命名为pTka。以枯草芽孢杆菌基因组DNA和pZA23trc为模板，通过PCR扩增alsS和pZA23-trc片段。将扩增的片段融合在一起，得到的质粒被命名为p23S。随后，以大肠杆菌K-12 MG1655基因组DNA为模板，通过PCR扩增ilvC和ilvD的基因集，克隆到p23S的sacI位点，得到的质粒命名为p23SCD。使用大肠杆菌K-12 MG1655基因组DNA和pSAK作为模板，通过PCR扩增pgl和pSAK片段。将扩增的片段融合在一起，所得质粒被标记为pSp。以大肠杆菌K-12 MG1655基因组DNA为模板，通过PCR扩增zwf，将扩增片段克隆到pSp的kpnI位点，得到的质粒命名为pSzp。以大肠杆菌K-12 MG1655基因组DNA为模板，通过PCR扩增edd和eda。以edd和eda的扩增片段为tem板，通过PCR扩增edd和eda的基因集。将Te扩增片段克隆到pSzp的bamHI位点，将得到的质粒命名为pSzpee。
参考文献：Noda S, Mori Y, Oyama S, Kondo A, Araki M, Shirai T. Reconstruction of metabolic pathway for isobutanol production in Escherichia coli. Microb Cell Fact. 2019 Jul 18;18(1):124.
