采用密码子优化法合成了编码ALA合成酶的荚膜梭菌SB1003 hemA基因。以球形红杆菌2.4.1、巴斯德毕赤酵母GS115、酿酒酵母s288c和根癌农杆菌C58的基因组DNA为模板，通过PCR扩增其他hemA基因。在每个基因的上游添加相同的核糖体结合位点。将近端具有EcoRI和BamHI限制性位点的PCR产物克隆到用相同酶消化的谷氨酸杆菌表达载体pEC-XK99E中，得到pEC SB、pEC RS、pEC GS、pEC SC和pEC-at。以谷氨酸杆菌ATCC 13032的基因组DNA为模板，通过PCR扩增基因cg0949、cg0766、cg1280-cg2421-cg0441和cg1132，以大肠杆菌MG1655的基因组DNA作为模板，通过聚合酶链式反应扩增rhtA。这是因为。将扩增的PCR产物组装到用XbaI消化的载体pEC-SB中，得到质粒pEC-SB-gltA、pEC-SB-icd、pEC-SB odhA、pEC-SB-coaA、pEC-SB rhtA和pEC-SB-rhtA-coaA。
参考文献：Yang P, Liu W, Cheng X, Wang J, Wang Q, Qi Q. A New Strategy for Production of 5-Aminolevulinic Acid in Recombinant Corynebacterium glutamicum with High Yield. Appl Environ Microbiol. 2016 Apr 18;82(9):2709-2717.
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采用密码子优化法合成了编码ALA合成酶的荚膜梭菌SB1003 hemA基因。以球形红杆菌2.4.1、巴斯德毕赤酵母GS115、酿酒酵母s288c和根癌农杆菌C58的基因组DNA为模板，通过PCR扩增其他hemA基因。在每个基因的上游添加相同的核糖体结合位点。将近端具有EcoRI和BamHI限制性位点的PCR产物克隆到用相同酶消化的谷氨酸杆菌表达载体pEC-XK99E中，得到pEC SB、pEC RS、pEC GS、pEC SC和pEC-at。以谷氨酸杆菌ATCC 13032的基因组DNA为模板，通过PCR扩增基因cg0949、cg0766、cg1280-cg2421-cg0441和cg1132，以大肠杆菌MG1655的基因组DNA作为模板，通过聚合酶链式反应扩增rhtA。这是因为。将扩增的PCR产物组装到用XbaI消化的载体pEC-SB中，得到质粒pEC-SB-gltA、pEC-SB-icd、pEC-SB odhA、pEC-SB-coaA、pEC-SB rhtA和pEC-SB-rhtA-coaA。
参考文献：Yang P, Liu W, Cheng X, Wang J, Wang Q, Qi Q. A New Strategy for Production of 5-Aminolevulinic Acid in Recombinant Corynebacterium glutamicum with High Yield. Appl Environ Microbiol. 2016 Apr 18;82(9):2709-2717.
