首先用Cas9酶表达质粒（p51）转化酵母细胞，并在YPD（E）固体板上用遗传霉素进行筛选。然后将携带p51的酵母细胞在含有遗传霉素的YPD（E）培养基中预培养，以便用gRNA质粒和线性供体进行第二次转化。在YPD（E）固体营养板上，用p51和gRNA质粒的相关抗生素选择Te转化体。使用标准Taq聚合酶进行PCR确认后，将树阳性菌落接种在YPD（E）培养基中，并在YPD培养基中转移三次以丢失质粒。
参考文献：Huo G, Foulquié-Moreno MR, Thevelein JM. Development of an industrial yeast strain for efficient production of 2,3-butanediol. Microb Cell Fact. 2022 Sep 29;21(1):199.
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一种可高效生产2,3-丁二醇的工业酵母菌菌株的研制
首先用Cas9酶表达质粒（p51）转化酵母细胞，并在YPD（E）固体板上用遗传霉素进行筛选。然后将携带p51的酵母细胞在含有遗传霉素的YPD（E）培养基中预培养，以便用gRNA质粒和线性供体进行第二次转化。在YPD（E）固体营养板上，用p51和gRNA质粒的相关抗生素选择Te转化体。使用标准Taq聚合酶进行PCR确认后，将树阳性菌落接种在YPD（E）培养基中，并在YPD培养基中转移三次以丢失质粒。
参考文献：Huo G, Foulquié-Moreno MR, Thevelein JM. Development of an industrial yeast strain for efficient production of 2,3-butanediol. Microb Cell Fact. 2022 Sep 29;21(1):199.
