转入质粒筛选菌株时,有可能用的培养基抗性不足,导致最后挑的克隆是杂菌。
菌落PCR鉴定很容易有假阳性。一般氨苄的终浓度要100ug/ml,卡那霉素要50ug/ml,配置时需要培养基的温度不烫手时再加入抗生素,而且含抗生素的培养基培养板不能放置超过一个月。
建议在菌PCR阳性的基础上加做酶切鉴定,如果酶切鉴定都正确,一般不会测序测不出来。
培养基最好要自己配,抗生素最好要用自己的。
转入质粒筛选菌株时,有可能用的培养基抗性不足,导致最后挑的克隆是杂菌。
菌落PCR鉴定很容易有假阳性。一般氨苄的终浓度要100ug/ml,卡那霉素要50ug/ml,配置时需要培养基的温度不烫手时再加入抗生素,而且含抗生素的培养基培养板不能放置超过一个月。
建议在菌PCR阳性的基础上加做酶切鉴定,如果酶切鉴定都正确,一般不会测序测不出来。
培养基最好要自己配,抗生素最好要用自己的。
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