质粒构建是使用由谷氨酸棒杆菌WT、大肠杆菌DH5α或产酸杆菌DSM4798的基因组DNA生成的PCR片段作为模板DNA进行的。这些片段通过Gibson Assembly（克隆到线性化载体中，所得反应用于使用氯化钙法转化大肠杆菌DH5α细胞。因此，pEKEx3和pK19mob-sacB用限制性内切酶SmaI消化，pVWEx1用BamHI消化。为了纯化PCR片段和消化质粒，使用了PCR纯化试剂盒或MinElute PCR纯化试剂箱。为了删除基因cg1497和hdpA，使用自杀载体pK19mobsacB构建了新的质粒。对于cg1497的缺失，使用引物从谷氨酸梭菌的基因组DNA中扩增出该基因侧翼的基因组区域。纯化得到的PCR片段，并通过Gibson Assembly将其克隆到线性化载体pK19mobsacB中，得到质粒pK19mobsacB-Δcg1497。
参考文献：Siebert D, Wendisch VF. Metabolic pathway engineering for production of 1,2-propanediol and 1-propanol by Corynebacterium glutamicum. Biotechnol Biofuels. 2015 Jun 24;8:91.
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质粒构建是使用由谷氨酸棒杆菌WT、大肠杆菌DH5α或产酸杆菌DSM4798的基因组DNA生成的PCR片段作为模板DNA进行的。这些片段通过Gibson Assembly（克隆到线性化载体中，所得反应用于使用氯化钙法转化大肠杆菌DH5α细胞。因此，pEKEx3和pK19mob-sacB用限制性内切酶SmaI消化，pVWEx1用BamHI消化。为了纯化PCR片段和消化质粒，使用了PCR纯化试剂盒或MinElute PCR纯化试剂箱。为了删除基因cg1497和hdpA，使用自杀载体pK19mobsacB构建了新的质粒。对于cg1497的缺失，使用引物从谷氨酸梭菌的基因组DNA中扩增出该基因侧翼的基因组区域。纯化得到的PCR片段，并通过Gibson Assembly将其克隆到线性化载体pK19mobsacB中，得到质粒pK19mobsacB-Δcg1497。
参考文献：Siebert D, Wendisch VF. Metabolic pathway engineering for production of 1,2-propanediol and 1-propanol by Corynebacterium glutamicum. Biotechnol Biofuels. 2015 Jun 24;8:91.
