使用PrimeSTAR GXL DNA聚合酶和引物NRPS_FH-F-Not I和NRPS_FH-R-Not I以C.clavata基因组DNA为模板扩增C.clavata NRPS基因的前半部分。将扩增的片段克隆到pZErO-2的EcoRV（钝端）位点。然后，用NotI消化含有NRPS基因前半部分的片段，校正并插入pAAG Cre的NotI位点，米曲霉的选择性标记和木聚糖酶编码基因启动子有条件表达的Cre重组酶基因（Cre）都被设计为位于突变lox序列slox66和lox71之间。通过用glaA终止子替换pAAAXG-Cre的amyA终止子构建质粒。使用PrimeSTAR GXL DNA聚合酶，用引物扩增三个片段，分别命名为NRPS rh片段A、NRPS rh碎片B和NRPS rh片断C。使用illustra GFX PCR DNA和凝胶带纯化试剂盒通过凝胶提取纯化扩增的片段，并根据制造商的说明使用In Fusion HD克隆试剂盒（Clontech）与NotI消化的pAAG-Cre融合。
参考文献：Yoshimi A, Yamaguchi S, Fujioka T, Kawai K, Gomi K, Machida M, Abe K. Heterologous Production of a Novel Cyclic Peptide Compound, KK-1, in Aspergillus oryzae. Front Microbiol. 2018 Apr 9;9:690.
技术服务 Technology Services
联系我们
CONTACT US
-
0574-87917803
服务热线 -
testobio@163.com
邮箱
使用PrimeSTAR GXL DNA聚合酶和引物NRPS_FH-F-Not I和NRPS_FH-R-Not I以C.clavata基因组DNA为模板扩增C.clavata NRPS基因的前半部分。将扩增的片段克隆到pZErO-2的EcoRV（钝端）位点。然后，用NotI消化含有NRPS基因前半部分的片段，校正并插入pAAG Cre的NotI位点，米曲霉的选择性标记和木聚糖酶编码基因启动子有条件表达的Cre重组酶基因（Cre）都被设计为位于突变lox序列slox66和lox71之间。通过用glaA终止子替换pAAAXG-Cre的amyA终止子构建质粒。使用PrimeSTAR GXL DNA聚合酶，用引物扩增三个片段，分别命名为NRPS rh片段A、NRPS rh碎片B和NRPS rh片断C。使用illustra GFX PCR DNA和凝胶带纯化试剂盒通过凝胶提取纯化扩增的片段，并根据制造商的说明使用In Fusion HD克隆试剂盒（Clontech）与NotI消化的pAAG-Cre融合。
参考文献：Yoshimi A, Yamaguchi S, Fujioka T, Kawai K, Gomi K, Machida M, Abe K. Heterologous Production of a Novel Cyclic Peptide Compound, KK-1, in Aspergillus oryzae. Front Microbiol. 2018 Apr 9;9:690.
