为了靶向删除类胡萝卜素生成操纵子（cg0717-cg0723和cg2668-cg2672）、crtE（cg0723）和idsA（cg2384），使用了自杀载体pK19mobsacB。分别使用引物对A/B和C/D从谷氨酸棒杆菌WT的基因组DNA中扩增出相应基因/操纵子侧翼的基因组区域。通过Gibson法将所得扩增物克隆到pK19mobsacB中，从而构建缺失载体。通过使用引物对E/F对构建的突变体进行PCR分析，验证了基因或操纵子的成功去除。
参考文献：Henke NA, Wichmann J, Baier T, Frohwitter J, Lauersen KJ, Risse JM, Peters-Wendisch P, Kruse O, Wendisch VF. Patchoulol Production with Metabolically Engineered Corynebacterium glutamicum. Genes (Basel). 2018 Apr 17;9(4):219.
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为了靶向删除类胡萝卜素生成操纵子（cg0717-cg0723和cg2668-cg2672）、crtE（cg0723）和idsA（cg2384），使用了自杀载体pK19mobsacB。分别使用引物对A/B和C/D从谷氨酸棒杆菌WT的基因组DNA中扩增出相应基因/操纵子侧翼的基因组区域。通过Gibson法将所得扩增物克隆到pK19mobsacB中，从而构建缺失载体。通过使用引物对E/F对构建的突变体进行PCR分析，验证了基因或操纵子的成功去除。
参考文献：Henke NA, Wichmann J, Baier T, Frohwitter J, Lauersen KJ, Risse JM, Peters-Wendisch P, Kruse O, Wendisch VF. Patchoulol Production with Metabolically Engineered Corynebacterium glutamicum. Genes (Basel). 2018 Apr 17;9(4):219.
