用于表达基因的质粒pYB1s和pLB1a具有复制起点、链霉素和氨苄青霉素抗性基因、araBAD启动子（pBAD）、多个克隆位点和rrnB终止子。对布鲁氏菌（T.brucei）和塞氏菌（S.cerevisiae）的IPS基因进行密码子优化合成。通过PCR扩增用于生产肌醇的酶的编码核苷酸序列，并通过T4连接和Gibson组装将其连接到XhoI和SpeI位点之间的载体中。大肠杆菌transT1用于分子克隆。大肠杆菌BW25113被用作遗传修饰和肌醇生产的亲本菌株。基因敲除菌株来自KEIO收集。P1病毒介导的转染用于整合到染色体中。Crispr-Cas9系统用于基因敲除、替换和RBS或启动子的改变。
参考文献：You R, Wang L, Shi C, Chen H, Zhang S, Hu M, Tao Y. Efficient production of myo-inositol in Escherichia coli through metabolic engineering. Microb Cell Fact. 2020 May 24;19(1):109.
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用于表达基因的质粒pYB1s和pLB1a具有复制起点、链霉素和氨苄青霉素抗性基因、araBAD启动子（pBAD）、多个克隆位点和rrnB终止子。对布鲁氏菌（T.brucei）和塞氏菌（S.cerevisiae）的IPS基因进行密码子优化合成。通过PCR扩增用于生产肌醇的酶的编码核苷酸序列，并通过T4连接和Gibson组装将其连接到XhoI和SpeI位点之间的载体中。大肠杆菌transT1用于分子克隆。大肠杆菌BW25113被用作遗传修饰和肌醇生产的亲本菌株。基因敲除菌株来自KEIO收集。P1病毒介导的转染用于整合到染色体中。Crispr-Cas9系统用于基因敲除、替换和RBS或启动子的改变。
参考文献：You R, Wang L, Shi C, Chen H, Zhang S, Hu M, Tao Y. Efficient production of myo-inositol in Escherichia coli through metabolic engineering. Microb Cell Fact. 2020 May 24;19(1):109.
