使用TIANamp细菌DNA试剂盒分离来自氧化葡糖杆菌DSM2003的基因组DNA，并将其用作gox1230-gox1232、tufB启动子和gHp0169启动子扩增的模板。将得到的tufB启动子/gHp0169启动子和质粒pBBR1MCS5用限制性内切酶SacI和XbaI双重消化并连接，构建质粒pBBR1MCS5-PtufB/P gHp0169。将构建的质粒和ga2dh扩增子用限制性内切酶XbaI和BamHI双酶切并连接，构建了质粒pBBR1MCS5-PtufB-ga2dh和pBBR1MCS 5-P gHp0169-ga2dh。此外，用引物氧化葡糖杆菌DSM2003的基因组DNA中PCR扩增出编码ga2dh基因及其自身启动子。然后用限制性内切酶XbaI和PstI双酶切得到的扩增子和质粒PBBR1MCS5并连接，构建质粒PBBR1MCS5-Pga2dh-ga2dh。将构建体转化到大肠杆菌DH5α中。
参考文献：Li K, Mao X, Liu L, Lin J, Sun M, Wei D, Yang S. Overexpression of membrane-bound gluconate-2-dehydrogenase to enhance the production of 2-keto-D-gluconic acid by Gluconobacter oxydans. Microb Cell Fact. 2016 Jul 9;15(1):121.
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使用TIANamp细菌DNA试剂盒分离来自氧化葡糖杆菌DSM2003的基因组DNA，并将其用作gox1230-gox1232、tufB启动子和gHp0169启动子扩增的模板。将得到的tufB启动子/gHp0169启动子和质粒pBBR1MCS5用限制性内切酶SacI和XbaI双重消化并连接，构建质粒pBBR1MCS5-PtufB/P gHp0169。将构建的质粒和ga2dh扩增子用限制性内切酶XbaI和BamHI双酶切并连接，构建了质粒pBBR1MCS5-PtufB-ga2dh和pBBR1MCS 5-P gHp0169-ga2dh。此外，用引物氧化葡糖杆菌DSM2003的基因组DNA中PCR扩增出编码ga2dh基因及其自身启动子。然后用限制性内切酶XbaI和PstI双酶切得到的扩增子和质粒PBBR1MCS5并连接，构建质粒PBBR1MCS5-Pga2dh-ga2dh。将构建体转化到大肠杆菌DH5α中。
参考文献：Li K, Mao X, Liu L, Lin J, Sun M, Wei D, Yang S. Overexpression of membrane-bound gluconate-2-dehydrogenase to enhance the production of 2-keto-D-gluconic acid by Gluconobacter oxydans. Microb Cell Fact. 2016 Jul 9;15(1):121.
