通过碱性SDS法从G.oxydans T-100中提取质粒pF4，并用CsCl超速离心纯化。用NcoI消化pSDH155，用DNA聚合酶（Klenow片段）填充，得到pSDH155 NK，其中位于4336至4341位的原始NcoI位点被破坏。使用来自pSDH155的EcoRI-PstI DNA片段作为模板进行PCR。PCR产物用MluI和SspI消化。将得到的片段替换到pSDH155 NK的相应区域，获得质粒pSDH155 NN，该质粒在SNDH基因的上游区域携带一个新的独特NcoI位点。
参考文献：Saito Y, Ishii Y, Hayashi H, Imao Y, Akashi T, Yoshikawa K, Noguchi Y, Soeda S, Yoshida M, Niwa M, Hosoda J, Shimomura K. Cloning of genes coding for L-sorbose and L-sorbosone dehydrogenases from Gluconobacter oxydans and microbial production of 2-keto-L-gulonate, a precursor of L-ascorbic acid, in a recombinant G. oxydans strain. Appl Environ Microbiol. 1997 Feb;63(2):454-60.
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通过碱性SDS法从G.oxydans T-100中提取质粒pF4，并用CsCl超速离心纯化。用NcoI消化pSDH155，用DNA聚合酶（Klenow片段）填充，得到pSDH155 NK，其中位于4336至4341位的原始NcoI位点被破坏。使用来自pSDH155的EcoRI-PstI DNA片段作为模板进行PCR。PCR产物用MluI和SspI消化。将得到的片段替换到pSDH155 NK的相应区域，获得质粒pSDH155 NN，该质粒在SNDH基因的上游区域携带一个新的独特NcoI位点。
参考文献：Saito Y, Ishii Y, Hayashi H, Imao Y, Akashi T, Yoshikawa K, Noguchi Y, Soeda S, Yoshida M, Niwa M, Hosoda J, Shimomura K. Cloning of genes coding for L-sorbose and L-sorbosone dehydrogenases from Gluconobacter oxydans and microbial production of 2-keto-L-gulonate, a precursor of L-ascorbic acid, in a recombinant G. oxydans strain. Appl Environ Microbiol. 1997 Feb;63(2):454-60.
