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2022-05-05 02:33:43       好想做条狗

提取一革兰氏阴性菌的RNA,由于实验条件的要求,采用产毒素培养基(贫瘠培养基)进行摇菌16h后,抽提RNA,此时的菌液浓度已经超过OD600>2.0。在进行RNA抽提时候一直得到的量很低(低于50ng/ul)。

1/不论是用promega SV total RNA提取试剂盒还是用Trizol抽提,得到的量都低。抽提时候所用的菌液量为2mL,电泳时候为两条带。

2/怀疑是不是由于培养基贫瘠而使得RNA量太少,采用取6mL的菌液进行trizol抽提,得到的RNA量稍微提高了一些,在50-60ng/ul之间。但是电泳的时候只有一条带。。

请问,怎么提高我的RNA提取量和提取质量。会不会是培养基造成菌落RNA产量少以外,还使得其较难破壁?

ps:在LB培养基中提取RNA的时候得量适当。300ng/ul。 

解决办法:

加微量的溶菌酶先处理下再提,OD大于2的细菌应该十分浓,也有可能是细菌量太多,而trizol量有限,导致细菌被裂解的不彻底,所以RNA量低 


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