使用引物P1和P2通过PCR扩增来自解淀粉芽孢杆菌的编码2,3-BD脱氢酶（bdh）的bdh基因。使用引物P3和P4对来自解淀粉芽孢杆菌的编码甘油醛-3-磷酸（GAPDH）的gapA基因进行PCR扩增。将扩增的bdh基因插入pMA5-HapII质粒的NdeI和BamHI位点，以创建pMA5-bdh质粒。将扩增的gapA基因插入pMA5 HapII质粒的BamHI和MluI位点，以创建pMA5 gapA质粒。然后使用引物P4和P5对含有来自pMA5-gaA质粒的HapII启动子的gapA基因进行PCR扩增。将扩增的HapII-gapA基因插入pMA5-bdh质粒的MluI位点，以创建pMA5-bdh-HapII-gapA质粒。通过氯化钙法将质粒转化到大肠杆菌JM109细胞中。
参考文献：Yang T, Rao Z, Zhang X, Xu M, Xu Z, Yang ST. Improved production of 2,3-butanediol in Bacillus amyloliquefaciens by over-expression of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase and 2,3-butanediol dehydrogenase. PLoS One. 2013 Oct 2;8(10):e76149.
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参考文献：Yang T, Rao Z, Zhang X, Xu M, Xu Z, Yang ST. Improved production of 2,3-butanediol in Bacillus amyloliquefaciens by over-expression of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase and 2,3-butanediol dehydrogenase. PLoS One. 2013 Oct 2;8(10):e76149.
