将构建好的质粒转入到大肠杆菌DH5α中扩增 结果就是挑菌摇菌之后 用菌液为模板做PCR结果都没有 但是把该菌液用试剂盒提取质粒之后 用质粒PCR鉴定 有目的条带 大小也正确
同样的引物 为什么质粒PCR可以正常扩增目的条带 但是菌液PCR却做不出来
可以考虑一下引物的问题,原因是:质粒PCR可以,你已经去除了蛋白和其他杂质,说明没有问题。
菌液pcr,如果只是单纯的挑个单菌落作为pcr模板,菌液裂解会释放核酸和蛋白,如果引物设计的恰好和其他质粒外的DNA有一些不良结构,没有结果也是意料中的可能;
建议,如果是菌液pcr,可以试一下,把菌落煮沸以后,离心取上清做模板
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