首先，使用引物通过SOYing PCR将Pldh与ALS基因融合，产生一个侧翼有AvrII和NdeI限制性位点的DNA片段。成功连接到LS-ALS1后，将P.thermoglucidiasius GPAD基因启动子（Pgpad）与ALD基因融合，同时引入合成RBS。将得到的两侧为NotI和XhoI限制性位点的DNA片段与之前携带ALS的片段结合，得到质粒pMTL-BD。由于细胞毒性，质粒pMTL-BD不能在大肠杆菌中繁殖，用XhoI和NheI进行限制性消化后，将含有融合到天然bdh基因的rplS基因启动子的插入物与pMTL-BD连接，并在透析处理后直接电穿孔到NICMB 11955中。
参考文献：Sheng L, Madika A, Lau MSH, Zhang Y, Minton NP. Metabolic engineering for the production of acetoin and 2,3-butanediol at elevated temperature in Parageobacillus thermoglucosidasius NCIMB 11955. Front Bioeng Biotechnol. 2023 May 2;11:1191079.
技术服务 Technology Services
联系我们
CONTACT US
-
0574-87917803
服务热线 -
testobio@163.com
邮箱
首先，使用引物通过SOYing PCR将Pldh与ALS基因融合，产生一个侧翼有AvrII和NdeI限制性位点的DNA片段。成功连接到LS-ALS1后，将P.thermoglucidiasius GPAD基因启动子（Pgpad）与ALD基因融合，同时引入合成RBS。将得到的两侧为NotI和XhoI限制性位点的DNA片段与之前携带ALS的片段结合，得到质粒pMTL-BD。由于细胞毒性，质粒pMTL-BD不能在大肠杆菌中繁殖，用XhoI和NheI进行限制性消化后，将含有融合到天然bdh基因的rplS基因启动子的插入物与pMTL-BD连接，并在透析处理后直接电穿孔到NICMB 11955中。
参考文献：Sheng L, Madika A, Lau MSH, Zhang Y, Minton NP. Metabolic engineering for the production of acetoin and 2,3-butanediol at elevated temperature in Parageobacillus thermoglucosidasius NCIMB 11955. Front Bioeng Biotechnol. 2023 May 2;11:1191079.
