黄曲霉的检验检疫方法

1、薄层层析

薄层层析（thin-layer chromatography,tlc)是在黄曲霉毒素研究方面应用最广的分离技术.自1990年，它被列为aoac (association of official agricultural chemists)标准方法，该方法同时具有定性和定量分析黄曲霉毒素的功能。

2、液相色谱

液相色谱（liquid chromatography,lc)与薄层层析在许多方面具有相似性，二者互相补充.通常用tlc进行前期的条件设定，选择适宜的分离条件后，再用lc进行黄曲霉毒素的定量测定。

3、免疫化学分析

利用具有高度专一性的单克隆抗体或多克隆抗体设计的黄曲霉毒素的免疫分析方法，也是最常用的黄曲霉毒素检测方法.这类方法通常包括放射免疫分析方法（radioimmunoassay,ria),酶联免疫法（enzyme-linked of immunosorbent assay,elisa)和免疫层析法（immunoaflinity column assay,ica).它们均可以对黄曲霉毒素进行定量测定。

(1) 免疫亲和柱-荧光分光光度法和免疫亲和术-hplc法

免疫亲和柱法和酶联免疫吸附法虽然都可达到速简便效果，但酶联免疫吸附法仅能检测单一毒素（如黄曲霉毒素b1)含量，而且易出现假阳性结果，难以控制.免疫亲和柱法（包括荧光光度法和hplc法）却能达到既定量准确又快速简便的要求。

(2) 酶联免疫吸附法

1996年，nakane 建立了辣根过氧化物酶标记抗体的测定技术.由于该方法简便，敏感，特异，可作为多种抗原或抗体的测定，20世纪70年代后期，该方法引入真菌毒素的检测中，下面介绍的是竞争性酶联免疫吸附间接法检测黄曲霉毒素b1。

原理：将已知抗原吸附在固态载体表面，洗除末吸附抗原，加入一定量抗体与待测样品（含有抗原）提取液的混合液，竞争培养后，在固相载体表面形成抗原抗体复合物.洗除多余抗体成分，然后加入酶标记的抗球蛋白的第二抗体结合物，与吸附在固体表面的抗原抗体结合物相结合，再加入酶底物.在酶的催化作用下，底物发生降解反应，产生有色物质，通过酶标检测仪测出酶底物的降解量，从而推知被测样品中的抗原量。

(3) 微柱筛选法

可以用来半定量测定各种食品中黄曲霉毒素b1,b2,g1,g2的总量。

原理：样品提取液中的黄曲霉毒素被微柱管风硅镁型吸附层吸附后，在波长365nm紫外光灯下显示蓝紫色荧光环，其荧光强度与黄曲霉毒素在一定的光密度范围内成正比例关系.若硅镁型吸附剂层未出现蓝紫色荧光，则样品为阴性（方法灵敏度为5-10ug/kg).由于在微柱上不能分离黄曲霉毒素b1,b2,g1,g2,所以测得结果为总的黄曲霉毒素含量。

(4) 一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法

一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法是利用单克隆抗体而设计的固相免疫分析法.由此产生的一步式黄曲霉毒素快速检测试纸可在5—10分钟完成对样品中黄曲霉毒素的定性测定.借助黄曲霉毒素标准样品，这种方法能估算黄曲霉毒素的含量，非常适用于现场测试和进行大量样品的初选。