使用引物扩增基因组DNA中pduC上下游区域。使用引物以pTOP FCF质粒为模板进行PCR，得到FRT-CmR-FRT。以PCR产物为模板，通过重叠延伸PCR方法，用引物扩增了横跨上游区域（1031 bp）、FRT-CmR-FRT（930 bp）和下游区域（843 bp）的2639 bp片段。将含有CmR的2639 bp线性片段转化到携带pRedET的产酸产酸杆菌M1中，并在37°C下在含有25μg/mL氯霉素的LB琼脂平板上选择氯霉素抗性菌落。
参考文献：Cho S, Kim T, Woo HM, Kim Y, Lee J, Um Y. High production of 2,3-butanediol from biodiesel-derived crude glycerol by metabolically engineered Klebsiella oxytoca M1. Biotechnol Biofuels. 2015 Sep 15;8:146.
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使用引物扩增基因组DNA中pduC上下游区域。使用引物以pTOP FCF质粒为模板进行PCR，得到FRT-CmR-FRT。以PCR产物为模板，通过重叠延伸PCR方法，用引物扩增了横跨上游区域（1031 bp）、FRT-CmR-FRT（930 bp）和下游区域（843 bp）的2639 bp片段。将含有CmR的2639 bp线性片段转化到携带pRedET的产酸产酸杆菌M1中，并在37°C下在含有25μg/mL氯霉素的LB琼脂平板上选择氯霉素抗性菌落。
参考文献：Cho S, Kim T, Woo HM, Kim Y, Lee J, Um Y. High production of 2,3-butanediol from biodiesel-derived crude glycerol by metabolically engineered Klebsiella oxytoca M1. Biotechnol Biofuels. 2015 Sep 15;8:146.
