用载体骨架pRS414-TEF1p-Cas9-CYC1t重建携带选择性标记纽瑟菌素和细菌抗性氨苄青霉素的Cas9-NAT质粒。通过扩增保存在gRNA trp HYB，构建了靶向酿酒酵母己糖激酶2基因的gRNA表达载体。 利用香菇gpd启动子引物从香菇基因组中分离出香菇甘油醛-3-磷酸脱氢酶（gpd）基因启动子。L.edodes gpd启动子的上游和下游区域含有Sac I和Spe I的限制性内切酶切割位点。通过Sac I、Spe I双酶消化，在连接酶作用下L.edodes gpd启动子被插入pBluescript II KS（-）质粒中。
参考文献：Yang P, Wu Y, Zheng Z, Cao L, Zhu X, Mu D, Jiang S. CRISPR-Cas9 Approach Constructing Cellulase sestc-Engineered Saccharomyces cerevisiae for the Production of Orange Peel Ethanol. Front Microbiol. 2018 Oct 10;9:2436.
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用载体骨架pRS414-TEF1p-Cas9-CYC1t重建携带选择性标记纽瑟菌素和细菌抗性氨苄青霉素的Cas9-NAT质粒。通过扩增保存在gRNA trp HYB，构建了靶向酿酒酵母己糖激酶2基因的gRNA表达载体。 利用香菇gpd启动子引物从香菇基因组中分离出香菇甘油醛-3-磷酸脱氢酶（gpd）基因启动子。L.edodes gpd启动子的上游和下游区域含有Sac I和Spe I的限制性内切酶切割位点。通过Sac I、Spe I双酶消化，在连接酶作用下L.edodes gpd启动子被插入pBluescript II KS（-）质粒中。
参考文献：Yang P, Wu Y, Zheng Z, Cao L, Zhu X, Mu D, Jiang S. CRISPR-Cas9 Approach Constructing Cellulase sestc-Engineered Saccharomyces cerevisiae for the Production of Orange Peel Ethanol. Front Microbiol. 2018 Oct 10;9:2436.
