以粘质链霉菌MG1的基因组DNA为模板，使用分别含有EcoRI和HindIII限制性位点的引物对slaC-1和slaC-2，通过PCR扩增slaC基因的ORF。将扩增产物消化并连接到载体pET-28a（+）的EcoRI和HindIII位点，以产生pET28a-slaC。将重组pET28a-slaC载体转化到大肠杆菌BL21（DE3）中进行蛋白表达。使用引物从粘质链霉菌MG1基因组DNA中扩增出末端重叠的slaC基因上游序列和下游序列的两个DNA片段。然后通过重叠PCR将这两个片段融合，产生slaC基因的框内缺失构建体。将重叠的PCR片段克隆到自杀载体pUTkm1中，产生pUT-slaC。将pUT-slaC载体转化到大肠杆菌S17-1λpir中，与粘质链霉菌MG1结合。使用引物UpslaC-1/DnslaC-2通过PCR验证卡那霉素敏感菌落。为了开发在粘质链霉菌中表达（2R，3R）-BDH的组成型表达载体，使用引物从粘质链霉菌MG1和枯草芽孢杆菌168的基因组DNA中扩增出slaC启动子（PslaC）序列和bdhA基因。通过重叠PCR将两个扩增产物合并，得到合并的片段，命名为p-bdhA。将p-bdhA片段消化并连接到载体pUC19的BamHI和HindIII位点，以产生重组pUC-pbdhA载体。然后通过电穿孔将pUC-pbdhA载体转化到slaC突变株中，产生粘质链霉菌-ΔslaC-bdhA菌株。
参考文献：Bai F, Dai L, Fan J, Truong N, Rao B, Zhang L, Shen Y. Engineered Serratia marcescens for efficient (3R)-acetoin and (2R,3R)-2,3-butanediol production. J Ind Microbiol Biotechnol. 2015 May;42(5):779-86. doi: 10.1007/s10295-015-1598-5. Epub 2015 Feb 10. Erratum in: J Ind Microbiol Biotechnol. 2015 Apr;42(4):1610. Erratum in: J Ind Microbiol Biotechnol. 2015 Jun;42(6):977.
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以粘质链霉菌MG1的基因组DNA为模板，使用分别含有EcoRI和HindIII限制性位点的引物对slaC-1和slaC-2，通过PCR扩增slaC基因的ORF。将扩增产物消化并连接到载体pET-28a（+）的EcoRI和HindIII位点，以产生pET28a-slaC。将重组pET28a-slaC载体转化到大肠杆菌BL21（DE3）中进行蛋白表达。使用引物从粘质链霉菌MG1基因组DNA中扩增出末端重叠的slaC基因上游序列和下游序列的两个DNA片段。然后通过重叠PCR将这两个片段融合，产生slaC基因的框内缺失构建体。将重叠的PCR片段克隆到自杀载体pUTkm1中，产生pUT-slaC。将pUT-slaC载体转化到大肠杆菌S17-1λpir中，与粘质链霉菌MG1结合。使用引物UpslaC-1/DnslaC-2通过PCR验证卡那霉素敏感菌落。为了开发在粘质链霉菌中表达（2R，3R）-BDH的组成型表达载体，使用引物从粘质链霉菌MG1和枯草芽孢杆菌168的基因组DNA中扩增出slaC启动子（PslaC）序列和bdhA基因。通过重叠PCR将两个扩增产物合并，得到合并的片段，命名为p-bdhA。将p-bdhA片段消化并连接到载体pUC19的BamHI和HindIII位点，以产生重组pUC-pbdhA载体。然后通过电穿孔将pUC-pbdhA载体转化到slaC突变株中，产生粘质链霉菌-ΔslaC-bdhA菌株。
参考文献：Bai F, Dai L, Fan J, Truong N, Rao B, Zhang L, Shen Y. Engineered Serratia marcescens for efficient (3R)-acetoin and (2R,3R)-2,3-butanediol production. J Ind Microbiol Biotechnol. 2015 May;42(5):779-86. doi: 10.1007/s10295-015-1598-5. Epub 2015 Feb 10. Erratum in: J Ind Microbiol Biotechnol. 2015 Apr;42(4):1610. Erratum in: J Ind Microbiol Biotechnol. 2015 Jun;42(6):977.
