工程用于核黄素生产的嗜热葡萄球菌

为了在嗜热葡萄球菌DSM 2542中表达天然和异质rib簇，分别使用引物枯草芽孢杆菌168、嗜热固氮菌NG80-2和天然宿主中克隆rib簇。从热葡萄球菌NG80-2的基因组DNA中扩增出用于驱动这些rib簇的启动子。然后，用Gibson组装从pucG3.8扩增的质粒骨架组装，产生质粒pUCG-Bs、pUCG-Gtd和pUCG-Gtg。为了测试嗜热葡糖苷酸葡萄球菌DSM 2542中可见标记的稳定性，使用引物对Pldh-F/Pldh-R从嗜热葡苷酸葡萄球菌NG80-2的基因组DNA中通过PCR扩增ldh启动子。使用引物从质粒pTAC RiboJ gfp中通过PCR增扩增sfgfp。随后，使用引物从pUB31中扩增出两个DNA片段和质粒脊骨，使用Gibson Assembly组装以产生质粒pUB-sfgfp。同样，从pCIM002和pCSW3中扩增出idgS-sfp和xylE基因，并将其与pUB31的ldh蛋白原和质粒骨架组装在一起，产生质粒中pUB-idgS-sfp和pUB-xylE。通过PCR扩增了pyr-EGtg、purRGtg、purAGtg、ccpNGtg和ldhGtg编码序列的上游和下游片段。然后，使用引物对pUB31s/pUB31a从pUB-sfGFP扩增质粒骨架，并用Gibson Assembly组装DNA片段，分别产生质粒pUB-pyrE、pUB-purR、pUB-pruA、pUB-ccpN和pUB-ldh。

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参考文献：Yang Z, Sun Q, Tan G, Zhang Q, Wang Z, Li C, Qi F, Wang W, Zhang L, Li Z. Engineering thermophilic Geobacillus thermoglucosidasius for riboflavin production. Microb Biotechnol. 2021 Mar;14(2):363-373. doi: 10.1111/1751-7915.13543. Epub 2020 Feb 25. PMID: 32096925; PMCID: PMC7936320.

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