通过PCR从肺炎克雷伯菌基因组中扩增ppc，并用TaKaRa MiniBEST琼脂糖凝胶DNA提取试剂盒（TaKaRa）纯化PCR产物。通过将pZGX04中的orf2替换为ppc，构建了表达载体pZGX04-ppc。从延森假单胞菌基因组中扩增出ldh和poxB侧翼的前后序列，分别从pZGX04和pRS303中扩增出氯霉素抗性基因（cm）和hygB。通过PCR融合三个片段并将其插入pUC18中，构建ldh/poxB缺失框架，获得缺失载体pUC18-ldh-cm和pUC18-poxB-hygB。首先将pZGX04-ppc、pUC18-ldh-cm和pUC18-poxB-hygB转化到大肠杆菌JM110中进行脱甲基化，然后转化到P.jenseni ATCC 4868中，构建P.jensenii（pZGX04-ppc）、P.jenseini-Δldh和P.jenseenii-ΔpoxB24。采用相同的方法将pZGX04-ppc转化为P.jenseini-Δldh，构建P.jenseni-Δldh（pZGX04-ppc）。
参考文献：Liu L, Guan N, Zhu G, Li J, Shin HD, Du G, Chen J. Pathway engineering of Propionibacterium jensenii for improved production of propionic acid. Sci Rep. 2016 Jan 27;6:19963.
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通过PCR从肺炎克雷伯菌基因组中扩增ppc，并用TaKaRa MiniBEST琼脂糖凝胶DNA提取试剂盒（TaKaRa）纯化PCR产物。通过将pZGX04中的orf2替换为ppc，构建了表达载体pZGX04-ppc。从延森假单胞菌基因组中扩增出ldh和poxB侧翼的前后序列，分别从pZGX04和pRS303中扩增出氯霉素抗性基因（cm）和hygB。通过PCR融合三个片段并将其插入pUC18中，构建ldh/poxB缺失框架，获得缺失载体pUC18-ldh-cm和pUC18-poxB-hygB。首先将pZGX04-ppc、pUC18-ldh-cm和pUC18-poxB-hygB转化到大肠杆菌JM110中进行脱甲基化，然后转化到P.jenseni ATCC 4868中，构建P.jensenii（pZGX04-ppc）、P.jenseini-Δldh和P.jenseenii-ΔpoxB24。采用相同的方法将pZGX04-ppc转化为P.jenseini-Δldh，构建P.jenseni-Δldh（pZGX04-ppc）。
参考文献：Liu L, Guan N, Zhu G, Li J, Shin HD, Du G, Chen J. Pathway engineering of Propionibacterium jensenii for improved production of propionic acid. Sci Rep. 2016 Jan 27;6:19963.
