使用Q5 DNA聚合酶通过PCR进行DNA扩增。去除天然BsaI和BbsI识别位点，以生成与Zymo Parts工具箱兼容的片段，保留原蛋白的原始氨基酸序列。对于表达嗜热脂肪酸G.丙氨酸脱氢酶或大肠杆菌乳酸脱氢酶的穿梭载体，使用基于pZMOB06的复制系统，并使用Pstrong100k*、rbs10k和TsoxR作为调控元件。丙氨酸脱氢酶的基因序列经过密码子优化，以适应Z.mobilis的密码子使用情况。通过使用自杀载体pZP950进行同源重组，实现了Z.mobilis染色体中天然pdc启动子被IPTG诱导型启动子PT7A1替换。染色体上与Ppdc相邻的同源臂长度为800 bp，位于壮观霉素抗性盒以及lacI表达盒和lacI调控的启动子PT7A1的侧翼。通过电穿孔用pZP950转化Z.mobilis ZM4。
参考文献：Frohwitter J, Behrendt G, Klamt S, Bettenbrock K. A new Zymomonas mobilis platform strain for the efficient production of chemicals. Microb Cell Fact. 2024 May 22;23(1):143. doi: 10.1186/s12934-024-02419-9. PMID: 38773442; PMCID: PMC11110354.
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使用Q5 DNA聚合酶通过PCR进行DNA扩增。去除天然BsaI和BbsI识别位点，以生成与Zymo Parts工具箱兼容的片段，保留原蛋白的原始氨基酸序列。对于表达嗜热脂肪酸G.丙氨酸脱氢酶或大肠杆菌乳酸脱氢酶的穿梭载体，使用基于pZMOB06的复制系统，并使用Pstrong100k*、rbs10k和TsoxR作为调控元件。丙氨酸脱氢酶的基因序列经过密码子优化，以适应Z.mobilis的密码子使用情况。通过使用自杀载体pZP950进行同源重组，实现了Z.mobilis染色体中天然pdc启动子被IPTG诱导型启动子PT7A1替换。染色体上与Ppdc相邻的同源臂长度为800 bp，位于壮观霉素抗性盒以及lacI表达盒和lacI调控的启动子PT7A1的侧翼。通过电穿孔用pZP950转化Z.mobilis ZM4。
参考文献：Frohwitter J, Behrendt G, Klamt S, Bettenbrock K. A new Zymomonas mobilis platform strain for the efficient production of chemicals. Microb Cell Fact. 2024 May 22;23(1):143. doi: 10.1186/s12934-024-02419-9. PMID: 38773442; PMCID: PMC11110354.
