以草酸假单胞菌114-2基因组为模板，用引物对pde_02864基因的组成型启动子进行PCR扩增。扩增了来自草酸假单胞菌114-2的9个β-葡萄糖苷酶的基因编码区，其中包括启动子和下游hph盒的20 bp重叠片段。通过质粒pSilent-1模板扩增hph的抗性盒。通过双联合PCR，使用巢式引物DF2和HPHsR，将这些基因过表达盒按照pde_02864（p）-bglx（-hph的顺序融合。所有BGL（X）过表达盒均经过凝胶纯化并转化到草酸假单胞菌114-2的原生质体中。为了在RE-10中产生BGL（X）过表达突变体，使用引物将BGL1、BGL4、BGL5过表达盒的标记基因hph替换为新的抗性基因sur。BGL1和BGL4的诱导表达盒是通过用相应的引物单独扩增其编码区而产生的，并与bgl2启动子和标记基因sur融合。
参考文献：Yao G, Wu R, Kan Q, Gao L, Liu M, Yang P, Du J, Li Z, Qu Y. Production of a high-efficiency cellulase complex via β-glucosidase engineering in Penicillium oxalicum. Biotechnol Biofuels. 2016 Mar 31;9:78.
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以草酸假单胞菌114-2基因组为模板，用引物对pde_02864基因的组成型启动子进行PCR扩增。扩增了来自草酸假单胞菌114-2的9个β-葡萄糖苷酶的基因编码区，其中包括启动子和下游hph盒的20 bp重叠片段。通过质粒pSilent-1模板扩增hph的抗性盒。通过双联合PCR，使用巢式引物DF2和HPHsR，将这些基因过表达盒按照pde_02864（p）-bglx（-hph的顺序融合。所有BGL（X）过表达盒均经过凝胶纯化并转化到草酸假单胞菌114-2的原生质体中。为了在RE-10中产生BGL（X）过表达突变体，使用引物将BGL1、BGL4、BGL5过表达盒的标记基因hph替换为新的抗性基因sur。BGL1和BGL4的诱导表达盒是通过用相应的引物单独扩增其编码区而产生的，并与bgl2启动子和标记基因sur融合。
参考文献：Yao G, Wu R, Kan Q, Gao L, Liu M, Yang P, Du J, Li Z, Qu Y. Production of a high-efficiency cellulase complex via β-glucosidase engineering in Penicillium oxalicum. Biotechnol Biofuels. 2016 Mar 31;9:78.
